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  • 产品名称: M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
  • 产品编号: R021-01
    • 产品规格: 10000 U

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M-MLV (H-) Reverse Transcriptase

稳定可靠的逆转录酶

  

点突变消除RNase H活性以获得长的cDNA产物

• 对于100 ng以上的RNA模板具有稳定可靠的逆转录表现

• 合成片段≤5 kb

可用于5’-RACE反应以及cDNA文库构建等实验

 



      野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下几种活性:依赖于RNA的DNA聚合酶活性;依赖于DNA的DNA聚合酶活性;RNase H活性。由于RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解模板RNA。M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通过定点突变得到的RNase H活性缺失的M-MLV突变体。与常见的通过删除(deletion) RNase H结构域方法得到的突变体相比,本产品保留了完整的蛋白结构,因此具有与野生型相同的聚合酶活性,可用于较长的cDNA合成以及全长cDNA文库的构建等。

组分说明:

R021-01

10000 U

5×RT Buffer

500 μl

M-MLV(H-) Reverse Transcriptase (200U/μl)

50 μl

 

贮藏条件: -20℃保存。

 

质量控制:

 

核酸外切酶残留检测:2000 U的本酶和50 μM 3’和5’突出退火双链产物在37℃下孵育16 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

 

核酸内切酶残留检测:2000 U的本酶和0.3 μg质粒A在37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

 

RNase残留检测:2000 U的本酶和1 μg HeLa细胞总RNA在37℃下孵育30 min,RNA电泳谱带不发生变化。

 

大肠杆菌DNA残留检测:200 U本品中残留的核酸经E.coli gDNA特异性的TaqMan探针qPCR检测,E.coli基因组残留低于10拷贝。

 

功能检测:逆转录体系中加入200 U本酶,以1 μg Hela细胞总RNA为模板,Oligo (dT)18为引物,42℃反应45 min。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增VIN基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的4.6 kb条带。

注意事项:

请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。

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