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  • 产品名称: HiScript Q RT SuperMix for qPCR
  • 产品编号: R122-01
    • 产品规格: 200 rxn

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HiScript® Q RT SuperMix for qPCR

具有高性价比的两步法RT-PCR/qPCR预混液

 

• 高热稳定性:推荐反应温度为42-50℃

即用型的SuperMix预混液使用方便省时

 

HiScript®两步法RT-qPCR试剂盒以高性价比的HiScript® Reverse Transcriptase为基础,对反应体系进行大幅简化,即用型的SuperMix将合成高质量第一链cDNA所需的所有成分合并为一管5 × SuperMix,只需加入RNA和水即可进行逆转录反应,RNA体积最多可加至反应总体积的80%,非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应,且SuperMix在-20℃不会冻结,使用方便。

本产品操作简便,降低操作过程中的污染机率。合成的cDNA可以用于SYBR® Green qPCR分析法和探针分析法,可以根据实验目的与AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme #Q111)、ChamQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme #Q311)和AceQ® qPCR Probe Master Mix (Vazyme #Q112) 等定量试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。合成的cDNA仅用于qPCR,并不适用于RT-PCR反应。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(Buffer、dNTP、HiScript® Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo(dT)18 primer mix),浓度为5×。另配有5 ×No RT Control Mix,用于配制无反转录酶的对照,判断qPCR模板是否来自cDNA

表1.HiScipt两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒选择指南

组分说明:

组分

R122-01 100 rxn (20 μl/rxn)

RNase free ddH2O

2×1 ml

5 ×qRT SuperMix a

400 μl

5 ×No RT Control Mix b

40 μl

a. 包含Buffer、dNTP、HiScript® Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo(dT)18 primer mix。

b. 除不含HiScript® Reverse Transcriptase外,其余成分与5×qRT SuperMix

相同,用于配制No RT对照反应,排除基因组残留

 

贮藏条件:-20℃。

 

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。

 

功能检测:以1 pg-1 µg HeLa 细胞总RNA为模板,qRT-PCR检测高中低三种丰度共七个基因表达。以4-6个数量级的模板量的对数值对CT值做标准曲线并计算扩增效率,R2>0.990,扩增效率在0.9到1.1之间。

注意事项:

1. 5 ×HiScript® qRT SuperMix及5 ×No RT Control Mix含有高浓度的甘油,在使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吸打充分混匀后,准确吸取。

 

2. 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的总RNA。如果目的基因表达量非常低,最多加入5 µg Total RNA,否则加入RNA量过高,可能会超出后续定量PCR的线性范围。

 

3. 如果加入RNA模板体积较大(如超过2 µl),请确保RNA是溶于水中而不是TE中,因为TE中的EDTA会对逆转录反应产生抑制。

 

4. 如果在qPCR实验中发现No RT Control的CT值与实验组相差<5,则说明RNA模板有可能受到基因组DNA的污染。此时,可选择HiScript® Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R123-01),以彻底消除基因组DNA的污染影响。

 

5. cDNA产物仅适用于qPCR反应,不适用于用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要,可使用HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Vazyme #R211)、HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R212或HiScript® 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Vazyme #R111)进行操作。

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