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miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

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    诺唯赞miRNA引物设计软件使用说明书.pdf

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    MR101说明书-V22.1.pdf

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    2022-05-27 09:46:01
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miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) microRNA 逆转录产品(茎环法) 优异的线性关系:在宽广的模板区间内具有良好的线性关系,可检出低至pg 级RNA 模板 优越的反应体系:适合的Buffer 组分及浓度,更适用于microRNA 的逆转录 简便的引物设计:提供配套的引物设计软件,使得引物设计更加简便 以小鼠肝脏组织Total RNA 的10 倍稀释梯度(10 pg-1 μg) 为模板,使用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 进行逆转录,得到的cDNA 使用miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101)扩增mmu-miR-16 基因。结果显示,在宽广的模板区间内,该配套产品具有优异的线性关系。 miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) 是适用于茎环法miRNA cDNA 一链合成的专用试剂盒,含基因组DNA 去除步骤,可以在42℃ 2 min 条件下快速去除基因组DNA 的污染,保证后续结果更加可靠。试剂盒基于的HiScript® II Reverse Transcriptase 具有较高的热稳定性,配以针对优化的缓冲体系,均有利于miRNA 特异性逆转录产物的生成。cDNA 产物后续定量,推荐使用本公司的miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme # MQ101),以获得优异的实验结果。同时,配套推出miRNA逆转录茎环引物和定量引物的设计软件,操作简单,为miRNA 实验保驾护航。 -20℃保存。
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miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

microRNA 逆转录产品(茎环法)

优异的线性关系:在宽广的模板区间内具有良好的线性关系,可检出低至pg 级RNA 模板

优越的反应体系:适合的Buffer 组分及浓度,更适用于microRNA 的逆转录

简便的引物设计:提供配套的引物设计软件,使得引物设计更加简便

以小鼠肝脏组织Total RNA 的10 倍稀释梯度(10 pg-1 μg) 为模板,使用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 进行逆转录,得到的cDNA 使用miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101)扩增mmu-miR-16 基因。结果显示,在宽广的模板区间内,该配套产品具有优异的线性关系。

miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) 是适用于茎环法miRNA cDNA 一链合成的专用试剂盒,含基因组DNA 去除步骤,可以在42℃ 2 min 条件下快速去除基因组DNA 的污染,保证后续结果更加可靠。试剂盒基于的HiScript® II Reverse Transcriptase 具有较高的热稳定性,配以针对优化的缓冲体系,均有利于miRNA 特异性逆转录产物的生成。cDNA 产物后续定量,推荐使用本公司的miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme # MQ101),以获得优异的实验结果。同时,配套推出miRNA逆转录茎环引物和定量引物的设计软件,操作简单,为miRNA 实验保驾护航。

-20℃保存。

关键词:
MR101-01/02
microRNA逆转录产品(茎环法)
MR101
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Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物,能否使用Vazyme #试剂盒(MR101+MQ101)?

A1:可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注:若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同,后续搭配MQ101无需合成反向引物,可以使用MQ101自带的mQ Primer R;若茎环引物序列不同,则MQ101提供的mQ Primer R无需使用,需合成正反向引物。

 

Q2、内参是否需要设计茎环引物及如何逆转录和定量的引物如何使用?

A2:若选择U6等较长的基因作为内参基因,由于序列相对较长,无需设计茎环逆转录引物,直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可,逆转录时投入内参下游引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参,需要设计茎环引物进行逆转录,推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。

 

Q3、如果要研究多个miRNA定量实验,是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录?

A3:是的,针对每个miRNA都要设计一条茎环逆转录引物,一管反应中只能逆转一个miRNA(内参也是一样),即不同逆转录引物均需要分管逆转录。

 

Q4、在逆转录时,多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行?

A4:不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物进行多个miRNA逆转录时,不同特异性茎环引物茎环结构之间会产生相互干扰和影响。

 

Q5、逆转录体系应该投入多少RNA?

A5:如果提取的是Total RNA,MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量,但是不同miRNA表达丰度不同,建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA,逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量加入,具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。

 

Q6、miRNA为什么要合成茎环引物?

A6:因为miRNA较短,如果使用普通逆转录和定量方法,无法设计定量引物,需要在逆转录阶段将cDNA延长

 

Jiang P, Ma X, Han S, et al. Characterization of the microRNA transcriptomes and proteomics of cochlear tissue derived small extracellular vesicles from mice of diferent ages after birth. Cell Mol Life Sci. 2022, 79(3): 154. PMID:35218422 (IF:9.261)

Zhang X, Shen J, Xu Q, et al. Long noncoding RNA lncRNA354 functions as a competing endogenous RNA of miR160b to regulate ARF genes in response to salt stress in upland cotton. Plant Cell Environ. 2021, 44(10): 3302-3321. PMID:34164822 (IF:7.228)

Yang X, Xiang Z, Sun Z, et al. Host MOV10 is induced to restrict herpes simplex virus 1 lytic infection by promoting type I interferon response. PLoS Pathog. 2022, 18(2): e1010301. PMID:35157734 (IF:6.823)

Sun X, Zhang X, Yang L, et al. A microRNA Cluster-Lefty Pathway is Required for Cellulose Synthesis During Ascidian Larval Metamorphosis. Front Cell Dev Biol. 2022, 10: 835906. PMID:35372357 (IF:6.684)

Zheng Z, Huang G, Wu Q,et al. NF-κB-mediated lncRNA AC007271.3 promotes carcinogenesis of oral squamous cell carcinoma by regulating miR-125b-2-3p/Slug. Cell Death Dis. 2020, 11(12): 1055. PMID:33311454 (IF:6.304)

Zhu Y, Zhao S, Deng K, et al. Integrated mRNA and Small RNA Sequencing Reveals a microRNA Regulatory Network Associated with Starch Biosynthesis in Lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) Rhizomes. Int J Mol Sci. 2022, 23(14): 7605. PMID:35886954 (IF:6.208)

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