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Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase

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P504说明书-V22.1.pdf

大小：

2022-09-19 10:37:57

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浏览量:

2562

Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase

高保真，高特异性，准确还原您的DNA序列！

价格：

725.0

市场价

元

725.0

浏览量:

2562

货号：

P504-d1

所属分类

高保真PCR

数量：

库存:

19998

*具体价格咨询当地业务员

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产品详情

FAQ

组分

说明书

相关文献

Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase

高保真，高特异性，准确还原您的DNA序列！

菌落PCR；分子克隆；基因鉴定；高GC体系；样本直扩

高特异性：添加了单克隆抗体，可进行热启动PCR

高保真度：保真度是Taq DNA Polymerase的69倍

扩增速度快：扩增速度可达15 sec/kb

模板适应性广：广泛适用于高GC含量等各种类型模板

本产品添加了独特的延伸因子，并对反应体系进行了深度优化，使其扩增稳定性、保真度和长片段的扩增能力得到了进一步提升，λDNA、质粒等简单模板有效扩增长达40 kb；基因组DNA等复杂模板有效扩增长达20 kb的片段。Phanta EVO HS中添加了在常温下能够抑制其5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动（Hot Start）PCR。该酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，扩增产物为平端，适用于ClonExpress和拓扑克隆试剂盒（Vazyme #C112/C113/C115/C601）。

组分	P504-d1 100 U	P504-d3 1,000 U
Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl)	100 μl	10 × P504-d1
5 × EVO Buffer (with 10 mM MgCl₂)	1.25 ml
25 mM MgCl₂	1 ml
dNTP Mix (10 mM each)	100 µl
5 × PCR Enhancer	500 µl
10 × Loading buffer	1.25 ml

-20°C保存

关键词:

P504

热启动高保真DNA聚合酶

热启动Pfu DNA高保真聚合酶

Pfu酶

热启动DNA聚合酶

热启动高保真酶

高保真phanta；phanta高保真酶

HS高保真酶；高保真PCR酶；PCR酶；菌落PCR；

Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer（货号P021），可以有效降低解链温度；模板的AT含量过高，可尝试使用针对高AT的产品（货号P501/P511）；模板为粗品，存在抑制物，建议降低模板浓度（稀释使用；若样本为植物叶片，要确保植物为非多糖多酚植物，取新鲜幼嫩的叶片，并将叶片面积剪小，如黄枪头尖部面积大小）；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符，如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活，温度过低则模板变性不彻底；若模板为酵母菌，可将预变性时间延长10min；退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度；如果目的片段较长，可尝试Touch Down 程序；检查延伸时间是否充足。

(6) Mg²⁺浓度不合适

Mg²⁺浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败；Mg²⁺浓度过高会降低PCR的特异性，应适当调整Mg²⁺浓度。

Q2：扩增的条带亮度不太亮。

A2：(1) 引物

检查引物是否降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 酶

可适当提高酶的使用量。

(4) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序；延长延伸时间，提高循环数。

Q3：扩增特异性差，非特异性扩增。