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Cas9 Nuclease

本产品是克隆Streptococcus pyogenes 的Cas9 基因后在大肠杆菌中表达纯化的高纯度Cas9 活性蛋白。Cas9 Nuclease 是一个RNA 导向的序列特异性双链DNA 内切酶。向导RNA 通过与靶序列互补来识别靶位点,并将Cas9 Nuclease 带到靶DNA 上。Cas9 Nuclease 有两个切割活性中心,分别切割靶DNA 的两条链从而产生DNA 双链断裂。切割位点为靶向区域内与NGG(PAM) 相距三个碱基处。
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M1: DL15,000 DNA Marker,

M2: DL5,000 DNA Marker

本产品是克隆Streptococcus pyogenes 的Cas9 基因后在大肠杆菌中表达纯化的高纯度Cas9 活性蛋白。Cas9 Nuclease 是一个RNA 导向的序列特异性双链DNA 内切酶。向导RNA 通过与靶序列互补来识别靶位点,并将Cas9 Nuclease 带到靶DNA 上。Cas9 Nuclease 有两个切割活性中心,分别切割靶DNA 的两条链从而产生DNA 双链断裂。切割位点为靶向区域内与NGG(PAM) 相距三个碱基处。

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关键词:
nuclease
cas9
dna
切割
蛋白
活性
高纯度
dl
rna
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1: 为什么观察到条带切割不完全?

A1: (1) 可能是由于Cas9 Nuclease、sgRNA、target DNA的比例不对引起的,我们推荐Cas9 Nuclease、sgRNA、target DNA的摩尔比例至少为10:10:1;

  1. 可能与sgRNA的序列有关,可以根据target DNA选择sgRNA序列;
  2. 可能由于sgRNA降解引起的,可以通过凝胶电泳验证sgRNA的完整性。

 

Q2: EN301中的50pmol和250pmol怎么转换成质量?

A2: 以50pmol为例:

Cas9蛋白分子量:160kDa,换算为160000 g/mol(1kDa ≈ 1000 g/mol)
50 pmol质量换算公式:50×10-12 mol×160000 g/mol=8×10-6 g
质量浓度=质量/体积=8×10-6 g/50 ul=160 ng/ul,通过这个公式进行换算就可以了。

 

Q3: 胶图显示没有目的切割片段,只有弥散条带,且在模板之上有较亮条带。

A3: 因为Cas9切割之后,蛋白和DNA还结合在一起,所以直接电泳会有smear或者分不开,clean up或者加热能让蛋白和DNA分开,跑胶就会有明显分开的DNA。

建议:首先确认条带要正确,marker正确;95度加热5分钟再跑胶;如果还不行,把酶切产物回收一下再跑胶。

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