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2 × Phanta Max Master Mix

高效扩增，轻松突破长达40 kb的λDNA/质粒和20 kb的gDNA
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P515-01/02/03
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高保真PCR
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2 × Phanta Max Master Mix

高效扩增，轻松突破长达40 kb的λDNA/质粒和20 kb的gDNA

分子克隆；基因鉴定；多重PCR；高AT/GC体系

·  保真度高：保真度是 Taq DNA Polymerase 的 128 倍

·  扩增更快：30 sec/kb 可高效扩增绝大多数片段

·  扩增更长：质粒、λDNA 等简单模板有效扩增长度可达 40 kb， cDNA 有效扩增长度可达 10 kb，基因组有效扩增长度可达 20 kb

·  适应性广：GC含量兼容范围24-83%，兼容粗品和样本直扩

·  操作便捷： 加入引物和模板即可进行扩增，减少实验操作的步骤

1.保真度高

采用二代测序方法（P. Mielinis. et al. Journal of Molecular Biology (2021)），测定不同聚合酶的扩增保真度。结果显示，Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase保真度是Taq DNA Polymerase的128倍。

图1

2. 优异的高GC 扩增能力

以人基因组为模板扩增 654 bp、 900 bp、 800 bp、 1,200 bp、 1,400 bp、426 bp 目标片段，各扩增子 GC 含量均高于 68%。

图2

3. 稳定的粗品扩增能力

图3

本产品添加了延伸因子、特异性促进因子以及平台期解抑制因子，使其在长片段扩增能力、扩增特异性以及扩增产量方面得到了大幅度提升。保真度是Taq酶的128倍，可进行高特异性的热启动PCR。本产品只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。使用方便，只需加入模板和引物即可进行扩增。产品经反复冻融后仍能保持稳定的活性。

组分 P515-01 P515-02 P515-03
2 × Phanta Max Master Mix 1 ml 5 × 1 ml 15 × 1 ml

-20°C保存

 

关键词:
P515
超高保真DNA聚合酶预混液
超高保真聚合酶预混液
超高保真酶mix
超高保真PCR mix
高保真mix
高保真PCR
Phanta高保真mix
PCR酶；菌落PCR；分子克隆；基因鉴定；样本直扩；多重PCR
未找到相应参数组，请于后台属性模板中添加

Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer（货号P021），可以有效降低解链温度；模板为粗品，存在抑制物，建议降低模板浓度（稀释使用；若样本为植物叶片，要确保植物为非多糖多酚植物，取新鲜幼嫩的叶片，并将叶片面积剪小，如黄枪头尖部面积大小）；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符，如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活，温度过低则模板变性不彻底；若模板为酵母菌，可将预变性时间延长10min；退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度；如果目的片段较长，可尝试Touch Down 程序；检查延伸时间是否充足。

 

Q2：扩增的条带亮度不太亮。

A2：(1) 引物

检查人工合成的引物是否降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序；延长延伸时间，提高循环数。

 

Q3：扩增特异性差，非特异性扩增。

A3：(1) 引物

引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体，可降低引物浓度进行优化，必要时重新设计引物。

(2) 模板

模板不纯，被污染，需重新制备模板。

模板降解或过量，通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。

(3) 反应程序

反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，降低循环数调整；如果出现比目的条带大的杂带，可缩短延伸时间、降低循环数。

 

Q4：扩增产物跑胶条带弥散或拖尾。

A4：(1) 胶

制胶时要使胶完全融化。

(2) 引物

检查引物是否降解。

(3) 模板

模板降解或过量，可通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长，模板是cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度，逆转录时不加随机引物重新逆转录。

(4) 反应程序

反应程序不够优化。退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度；尝试Touch Down 程序。

 

Q5：空白对照出现扩增产物。

A5：(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致，说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染，操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染，可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

 

Q6：高保真酶扩增保真性差，存在突变。

A6：高保真酶在PCR时扩增产物有突变，可以从以下几点来分析：

(1) 模板本身存在突变

检查模板，若模板是质粒，建议送质粒去测序；若模板是cDNA，建议重复实验，如果仍有突变，可能是cDNA有问题，建议重新制备cDNA，制备cDNA前检测RNA的完整度及纯度。

(2) 模板长时间在紫外光下照射，引入突变

切胶回收过程中避免长时间在紫外光下照射。

(3) 基因序列与NCBI上的不一致

建议再重复一次送去测序，若结果和上一次一样，说明序列可能和NCBI上的不一致。

(4) 少量序列存在非严谨序列

有相似重组序列，导致重组错位。

 

Q7：逆转录后的产物cDNA作为模板，使用高保真酶，一次应该加多少体积？

A7：说明书建议cDNA模板使用量为1-5μl（不超过PCR反应总体积的1/10），可在这个范围内尝试不同的使用量，摸索合适使用量。

 

Q8：带颜色的PCR产物(p520,p525扩增产物)是否影响酶切效果？

A8：经测试，带颜色的PCR产物不会影响酶切效果。

 

Q9：高保真酶扩增产物是否带A尾，如何加A尾

A9：（1）高保真酶扩增产物不带A，后续做克隆可尝试使用Vazyme无缝克隆产品C601；若进行TA克隆可用普通的Taq酶进行加A尾；

Chen X, Zhao Q, Zhao Y, et al. Targeted RNA N 6 -Methyladenosine Demethylation Controls Cell Fate Transition in Human Pluripotent Stem Cells. Adv Sci (Weinh). 2021, 8(11): e2003902. PMID:34105279 (IF:15.804)

Zhao C, Sheng W, Wang Y, et al. Conformational remodeling enhances activity of lanthipeptide zinc-metallopeptidases. Nat Chem Biol. 2022, 18(7): 724-732. PMID:35513512 (IF:15.04)

Tang Q, Guo Y, Meng L, et al. Chemical Tagging of Protein Lipoylation. Angew Chem Int Ed Engl. 2021, 60(8): 4028-4033. PMID:33174356 (IF:12.959)

Li D, Liu L, Qin Z, Yu S, et al. Combined evolutionary and metabolic engineering improve 2-keto-L-gulonic acid production in Gluconobacter oxydans WSH-004. Bioresour Technol. 2022, 354: 127107. PMID:35381333 (IF:11.889)

Meng L, Guo Y, Tang Q, et al. Metabolic RNA labeling for probing RNA dynamics in bacteria. Nucleic Acids Res. 2020, 48(22): 12566-12576. PMID:33245763 (IF:11.502)

Ding Z, Gao Q, Tong X, et al. MAPKs trigger antiviral immunity by directly phosphorylating a rhabdovirus nucleoprotein in plants and insect vectors. Plant Cell. 2022, 34(8): 3110-3127. PMID:35567529 (IF:11.277)

Chen Y, Qi F, Gao F, et al. Hovlinc is a recently evolved class of ribozyme found in human lncRNA. Nat Chem Biol. 2021, 17(5): 601-607. PMID:33753927 (IF:11.434)

Li Y, Yu Y, Liu X, et al. "The Arabidopsis MATERNAL EFFECT EMBRYO ARREST45 Protein Modulates Maternal Auxin Biosynthesis and Controls Seed Size by Inducing AINTEGUMENTA ". Plant Cell. 2021, 33(6): 1907-1926. PMID:33730150 (IF:9.638)

Xu J, Meng X, Yang Q, et al. Redox-sensitive CDC-42 clustering promotes wound closure in C. elegans. Cell Rep. 2021, 37(8): 110040. PMID:34818546 (IF:9.423)

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2 × Phanta Max Master Mix (Dye Plus)
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Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase
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Ultra GelRed (10,000 ×)
700.00
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700.00
DL5000 DNA Marker
60.00
DL5000 DNA Marker
60.00
FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit
220.00
FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit
220.00
ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit
800.00
ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit
800.00
5 min TOPO-Blunt Cloning Kit
750.00
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750.00
DH5α 化学感受态细胞
160.00
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160.00
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