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核酸蛋白互作

8000.00
货  号:
TD903-01/02
Hyperactive® Universal CUT&Tag Assay Kit for  Illumina   CUT&Tag实验操作指南(TD903)   CUT&Tag实验注意事项(TD903) 操作简便:全流程优化,磁珠提取安全高效 样本投入量低:技术革新,适用微量样本 抗体兼容性好:转座子升级,抗体亲和力高 测序质量高:扩增模块优化,数据真实可靠 信噪比高:背景远低于ChIP-Seq,重复性好 样本投入量低,信噪比高 针对不同起始量的K562 细胞(100、10,000 cells),使用TD903 进行H3K27me3 抗体的CUT&Tag实验,通过Agilent 2100 Bioanalyzer进行文库分布检测。结果显示对于不同细胞投入量(100、10,000 cells),均可构建出相似的ladder 状的文库,说明TD903 能够兼容低细胞起始量的实验。   针对不同起始量的K562 细胞(100、1,000、10,000、100,000 cells),使用TD903 进行H3K4me3 抗体的CUT&Tag 实验。结果显示不同投入量染色体图谱基本一致,100 个细胞即可提供与ChIP-Seq 结果一致的覆盖图谱。 适用性广 使用TD903 针对10,000个A549 细胞、Hela细胞和K562 细胞,进行H3K4me3 抗体的CUT&Tag 实验。结果显示TD903 适用于多种细胞系的DNA-蛋白质互作研究。 投入10,000 个K562 细胞,使用TD903 分别测试以下不同抗体:H3K4me3 (abcam#ab8580)、H3K27me3 (CST#9733S)、H3K27ac (abcam#ab4729)、RNA PoI II (abcam#ab26721) 、CTCF (CST#3418S)。结果显示TD903 适用于多种靶蛋白的DNA-蛋白质互作研究。 Hyperactive® Universal CUT&Tag Assay Kit for Illumina是针对Illumina高通量测序平台定向开发的用于研究蛋白质-DNA相互作用的试剂盒。CUT&Tag(Cleavage Under Targets & Tagmentation)技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新方法,使用Protein A/G融合的转座酶,在抗体引导下精准靶向目的蛋白,并在目的位点附近进行DNA的片段化。 本试剂盒优化了实验反应体系和建库流程,与传统的ChIP-Seq相比,具有细胞投入量低、实验周期短、信噪比高、可重复性好等优势,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,较大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。 BOX 1:ConA Beads和DNA Extract Beads 2 ~ 8℃保存,其余组分室温(15 ~ 25℃)保存,根据不同目的地调整运输方式。 BOX 2:5% Digitonin -30 ~ -15℃保存,室温(15 ~ 25℃)下可保存1周; 其余组分-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
8000.00
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TD903-01/02
浏览量:
1000
关键字:
细胞
td903
抗体
投入
不同
实验
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15
结果
8000.00
货  号:
TD901-01/02
Hyperactive® In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina     操作简单:可一步实现DNA的片段化和接头连接,仅需9 h即可实现从细胞到二代测序文库的转化 超高活性:兼具Protein G&Tn5活性,DNA片段化活性较高 细胞起始量低:可兼容低至60个细胞,甚至单细胞 纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低 1. CUT&Tag技术原理及应用 CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 CUT&Tag技术的实验流程简单,主要包括:①收集细胞;②分别孵育一抗和二抗;③孵育pA/pG-Tn5转座子(Hyperactive® pA/pG-Tn5 Transposon);④激活转座子,进行DNA片段化;⑤DNA提取;⑥文库扩增与纯化。   2. 转座子切割活性高 如图所示,对Vazyme #TD901中提供的pG-Tn5转座子进行活性检测,投入50 ng 人基因组DNA(gDNA),1 μl转座子可快速(10 min)实现DNA片段化,说明该融合酶切割DNA活性高。   3. 细胞起始量低 A: CUT&Tag峰形图 100 cells     10,000 cells 如图A所示:投入不同起始量的HEK293细胞(100或10,000个细胞),按照Vazyme #TD901说明书推荐的反应体系进行CUT&Tag实验;其中,pG-Tn5转座子使用的终浓度为0.04 μM,一抗为H3K27me3(CST,#9733),二抗为Goat anti Rabbit(Bioworld,#BS13271)。通过使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行文库分布检测,结果显示对于不同细胞投入量(100个或10,000个细胞),均可构建出与文献中类似的呈现Ladder状的文库,说明该体系能够兼容低细胞起始量的实验。   B:Peak 富集 如图B所示:将图A中的CUT&Tag文库进行二代测序分析,可以看出,100个细胞可以达到与10,000细胞类似的Peak富集,且信噪比显著高于ChIP-Seq。   4. 实验重复性好 如上图所示,投入不同起始量(1,000、10,000或100,000)的HEK293细胞,每种起始量做2个重复,按照Vazyme #TD901说明书推荐的反应体系进行CUT&Tag实验;其中,pG-Tn5转座子使用的终浓度为0.04 μM,一抗为H3K27me3(CST,#9733),二抗为Goat anti Rabbit(Bioworld,#BS13271),阴性对照为与一抗同源的IgG(CST,#2729)。对上述文库样本进行二代测序,针对富集的reads进行pearson相关性分析,可以看出,平行样本之间的重复性较好。 Hyperactive® In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina是针对CUT&Tag技术定向开发的专用试剂盒。CUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法,通过将Protein G或Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶融合,形成兼具双重活性的新型融合酶(Hyperactive® pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase),在抗体引导下精准靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。与传统的ChIP-Seq相比,该技术具有细胞投入量低、实验周期短、信噪比高、可重复性好等优势,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,较大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。 BOX 1:ConA beads 2 ~ 8℃保存,其余组分室温储存。 BOX 2:5% Digitonin -30 ~ -15℃保存,室温下可保存1周; 10 × Binding Buffer -30 ~ -15℃保存,2 ~ 8℃下可保存6个月; 其余组分-30 ~ -15℃储存。
8000.00
货  号:
TD901-01/02
浏览量:
3812
关键字:
illumina
细胞
dna
cut&tag
进行
活性
文库
实验
转座子
pg-tn5
TD901
6800.00
货  号:
S603-01/02
Hyperactive® pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag 操作简单:可一步实现DNA的片段化和接头连接,仅需9 h即可实现从细胞到二代测序文库的转化 超高活性:兼具Protein A&Tn5活性,DNA片段化活性较高 细胞起始量低:可兼容低至60个细胞,甚至单细胞 纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低 应用于CUT&Tag技术 CUT&Tag( Cleavage Under Targets and Tagmentation)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。  CUT&Tag技术的实验流程简单,主要包括:①收集细胞;②分别孵育一抗和二抗;③孵育经过Hyperactive® pA/pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag (#S603/S602)制备的转座子;④激活转座子,进行DNA片段化; ⑤DNA提取; ⑥文库扩增与纯化。 活性检测 如图所示,对使用#S603反应体系(2 μg和10 μg体系)生成的转座子进行活性检测,针对不同的DNA投入量(50 ng和100 ng),1 μl转座子可快速(10 min)实现DNA片段化,说明该融合酶活性很高。 Hyperactive® pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag是将Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶进行融合,形成同时具备转座酶与Protein A活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&Tag技术。与传统的蛋白质-基因组互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 组分 S603-01 (10 μg) S603-02 (20 μg) Hyperactive® pA-Tn5 Transposase ( 500ng/μl)a 20 μl 40 μl 5 × Tagment Buffer Lb 250 μl 500 μl Coupling Buffer 250 μl 500 μl Annealing Buffer 500 μl 1 ml a. #S603的质量浓度是500 ng/μl,换算成摩尔浓度是7.5 pmol/μl; b. 5 × Tagment Buffer L含Mg2+,用于测试制备的转座子片段化DNA的效果,而非CUT&Tag工作Buffer。 整个试剂盒于-85 ~ -65℃保存,干冰运输;收到货后Hyperactive® pA-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存,其余组分可于-30 ~ -15℃保存;生成的转座子于-30 ~ -15℃保存,有效期一年。
6800.00
货  号:
S603-01/02
浏览量:
3361
关键字:
cut&tag
活性
dna
细胞
转座子
片段
hyperactive
buffer
transposase
6800.00
货  号:
S602-01/02
Hyperactive® pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag 操作简单:可一步实现DNA的片段化和接头连接,仅需9 h即可实现从细胞到二代测序文库的转化 高活性:兼具Protein G&Tn5活性,DNA片段化活性较高 细胞起始量低:可兼容低至60个细胞,甚至单细胞 纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低 应用于CUT&Tag技术 CUT&Tag( Cleavage Under Targets and Tagmentation)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。  CUT&Tag技术的实验流程简单,主要包括:①收集细胞;②分别孵育一抗和二抗;③孵育经过Hyperactive® pA/pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag (#S603/S602)制备的转座子;④激活转座子,进行DNA片段化; ⑤DNA提取; ⑥文库扩增与纯化。   活性检测     如图所示,对使用#S602反应体系(2 μg和10 μg体系)生成的转座子进行活性检测,针对不同的DNA投入量(50 ng和100 ng),1 μl转座子可快速(10 min)实现DNA片段化,说明该融合酶活性高。 Hyperactive® pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag是将Protein G与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶进行融合,形成同时具备转座酶与Protein G活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&Tag技术。与传统的蛋白质-基因组互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 组分 S602-01 (10 μg) S602-02 (20 μg) Hyperactive® pG-Tn5 Transposase ( 500ng/μl)a 20 μl 40 μl 5 × Tagment Buffer Lb 250 μl 500 μl Coupling Buffer 250 μl 500 μl Annealing Buffer 500 μl 1 ml a. #S602的质量浓度是500 ng/μl,换算成摩尔浓度是7.5 pmol/μl; b. 5 × Tagment Buffer L含Mg2+,用于测试制备的转座子片段化DNA的效果,而非CUT&Tag工作Buffer。 整个试剂盒于-85 ~ -65℃保存,干冰运输;收到货后Hyperactive® pG-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存,其余组分可于-30 ~ -15℃保存;生成的转座子于-30 ~ -15℃保存,有效期一年。
6800.00
货  号:
S602-01/02
浏览量:
3361
关键字:
cut&tag
活性
dna
细胞
转座子
片段
hyperactive
buffer
transposase
5000.00
货  号:
S702-01/02
Hyperactive® pG-MNase for CUT&RUN 操作简单:利用酶切代替超声破碎,仅需1天即可实现从细胞到二代测序文库的转化 高活性:DNA片段化活性较高 细胞起始量低:可兼容低至50个细胞 纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低 应用于CUT&RUN技术 CUT&RUN(cleavage under targets and release using nuclease)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。 CUT&RUN技术的实验流程简单,主要包括: 1.收集细胞并将细胞与连有伴刀豆蛋白A的磁珠进行结合; 2.孵育一抗; 3.孵育pA/pG-MNase; 4.激活pA/pG-MNase进行片段化; 5.DNA提取; 6.文库构建。 活性检测 如图所示,针对300 ng人源基因组DNA,梯度加入不同量的S701或S702,于37℃进行酶切反应10 min。只需要0.1U 新型融合核酸酶即可实现300 ng人源基因组DNA片段化,表明该融合酶活性高。 Hyperactive® pG-MNase for CUT&RUN是将Protein G与微球菌核酸酶(Micrococcal nuclease,MNase)进行融合,形成同时具备Protein G与MNase双重活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&RUN技术。CUT&RUN技术简化了传统ChIP-seq的操作流程,仅需1 - 1.5天即可实现从细胞到二代测序文库构建,且细胞投入量低,信噪比高,可重复性好,广泛应用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 组分 S702-01(200 U) S702-02(400 U) Hyperactive® pG-MNase (10U/μl) 20 μl 40 μl MNase Dilution Buffer 200 μl 400 μl 于-30 ~ -15℃保存。运输条件:≤ 0℃。        
5000.00
货  号:
S702-01/02
浏览量:
1000
关键字:
cut&run
细胞
活性
pg-mnase
基因组
融合
技术
进行
文库
5000.00
货  号:
S701-01/02
Hyperactive® pA-MNase for CUT&RUN 操作简单:利用酶切代替超声破碎,仅需1天即可实现从细胞到二代测序文库的转化 高活性:DNA片段化活性较高 细胞起始量低:可兼容低至50个细胞 纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低 应用于CUT&RUN技术 CUT&RUN(cleavage under targets and release using nuclease)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。  CUT&RUN技术的实验流程简单,主要包括: 1.收集细胞并将细胞与连有伴刀豆蛋白A的磁珠进行结合; 2. 孵育一抗; 3. 孵育Protein A/G MNase; 4. 激活Protein A/G MNase进行片段化; 5.DNA提取; 6.文库构建。 活性检测 如图所示,针对300 ng质粒DNA,加入不同质量的pA-MNase于37℃进行酶切反应10 min。只需要0.5 ng pA-MNase即可实现300 ng质粒DNA片段化,说明该融合酶活性高。 Hyperactive® pA-MNase for CUT&RUN是将Protein A与经过工程学改造的高活性MNase进行融合,形成同时具备MNase外切酶活性与Protein A活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&RUN技术。与传统的蛋白质-基因组互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&RUN具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 组分 S701-01 S701-02 Hyperactive® pA-MNase (500ng/μl) 20 μl 40 μl 于-30 ~ -15℃保存,-20 ~ 0℃运输。
5000.00
货  号:
S701-01/02
浏览量:
1895
关键字:
cut&run
细胞
活性
pa-mnase
研究
mnase
protein
技术
进行
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