

搜索

科技成就健康生活

会员注册会员登录会员中心

查看购物车

中文 English

T7 RNAi Transcription Kit

科学研究试剂高通量测试药物研发试剂分子诊断试剂动物疫病诊断生物耗材原料和解决方案

科研试剂

产品分类 



高通量试剂

产品分类 



药物研发试剂

产品分类 



分子诊断试剂

产品分类 



动物疫病诊断

产品分类 



生物耗材

产品分类 



原料和解决方案

产品分类 



T7 RNAi Transcription Kit-V21.1.pdf

大小：

2021-04-09 17:25:53

下载

1/1

浏览量:

3718

T7 RNAi Transcription Kit

用于体外dsRNA 合成

价格：

1350.0

市场价

元

0.0

浏览量:

3718

货号：

TR102-01/02

所属分类

体外转录

数量：

库存:

79983

*具体价格咨询当地业务员



产品详情

FAQ

组分

说明书

相关文献

T7 RNAi Transcription Kit

用于体外dsRNA 合成

siRNA及长链dsRNA的体外转录；产物可用于RNAi实验

· 可以转录siRNA和长片段dsRNA；

· 产量高达20-80 μg；

· RNA磁珠可快速高效的纯化转录产物

图1. 500 bp dsRNA 2%琼脂糖凝胶电泳图

1：DL2000 Plus DNA Marker；2和4：500 bp dsRNA酶解前后产物（双端转）；3和5: 500 bp dsRNA酶解前后产物（混合转）。

图2. siRNA 12% PAGE电泳检测结果

1：siRNA转录产物；2：siRNA转录双酶消化产物；3：单链模板；4：双链退火模板

图3. siRNA干扰绿色荧光蛋白表达

左图为GFP质粒与negative control GFP siRNA共转染24 h后的293T细胞；右图为GFP质粒和positive GFP siRNA共转染24 h后的293T细胞。

T7 RNA ploymerase可识别带有T7启动子的DNA模版，以四种NTP 为底物，体外转录合成RNA。T7 RNAi Transcription Kit 是在T7 High Yield RNA Transcription Kit 基础上为转录双链RNA 而设计优化的版本，可用于转录21 bp 的siRNA 和长片段的dsRNA。转录产物经纯化后可用于阳离子脂质体、磷酸钙共沉淀、电穿孔、DEAE- 葡聚糖及显微注射等方法介导的RNAi 实验。一般情况下，一个反应可产生20 μg-80 μg 的RNA。

Box 1 于-20℃保存，Box 2 于4℃保存。

关键词:

T7 RNAi Transcription Kit

体外dsRNA合成

体外转录合成RNA

TR102

1. dsRNA 实验方案设计

dsRNA的实验设计有三种方案，

模板1和模板2分别在两个PCR管中转录后再将产物1:1退火成双链；
模板1和模板2在同一个PCR管中混合转录后退火成双链；
用双端带启动子的模板3转录后退火成双链；

一般情况下，方案（1）和（2）的转录产物量更高。若选择方案（1）和（2），模板投入量请按照1:1的比例进行转录，否则产物正义链和负义链RNA的量不相等，退火后会残余较多的单链RNA。

2. siRNA 模板链设计

siRNA由于转录模板比较短，所以通常采用化学合成的方式得到四条单链DNA模板，再两两退火成转录模板。siRNA 3’末端带两个游离的碱基会提高siRNA与mRNA的结合效率，游离碱基为UU时对靶基因的抑制效果最强，若游离碱基为GG则细胞内的RNase会降解这种结构，导致siRNA活性降低。

siRNA 3’端带有两个游离碱基，推荐在设计模板时在模板链3’端加两个A碱基。siRNA 的模板链包含：6个碱基的增强子、20个碱基的T7启动子、19-21个碱基的目标序列及2个游离的T碱基。结构如下所示：

增强子	T7启动子	特定序列
GATCAC	TAATACGACTCACTATAGGG	X19-21TT

3. 转录产物产量低

一般情况下，每个反应可以产生20-80 µg 的RNA，如果实验组产量很低，可能原因：

模板中含有抑制反应的成分；
模板投入量，模板长度及模板结构均与产量密切相关。若对照组产量正常但实验组产量低，说明实验模板本身原因导致产量低，请尝试以下方案解决：

纯化模板，并对模板准确定量；
加大模板投入量；
延长37°C 反应时间；
重新设计模板。

4. 短片段模板转录产量低

模板片段小，模板与酶的结合效率会较低，如合成siRNA 比合成其他长度的单双链RNA 产量低。建议适当延长反应时间或增加模板量以提高RNA 产量。

5. 产物电泳拖尾现象

电泳过程中有拖尾现象，可能原因是模板投入量较多或者两个模板不以1:1 投入而导致模板或者单链RNA 酶解不彻底，建议适当延长双酶解时间。模板与单链RNA 在总的转录产物中含量极低，一般不会影响后续实验。

6. 转录产物条带不单一

转录产物存在不同高级结构：建议用变性胶进行电泳，或者RNA经过加热变形后再跑胶；
转录时产生非特异性产物：如果不影响下游实验可忽略，若担心影响下游实验可切胶回收；
合成的dsRNA产物不特异：建议使用说明书中转录方案一（模板1和模板2分别在两个PCR管中转录后，定量后再将产物1:1退火成双链）；模板浓度不统一，导致转录出的两条链产量不一致；两条链转录效率不一致（属正常现象），有未退火的单链，用试剂盒中提供的酶消化可以消除。

7. TR102最长可以合成多长的RNA？

体外转录TR102的长片段dsRNA最长10kb以内。

8. 若合成模板的长度为50bp，反应时间建议为多少？

建议时间为4h,产量基本上可以满足需求。一般来说，合成小于0.3 Kb的RNA，可将反应延长至4 h或更长时间，过夜也是可以的，但产量不会多很多

9. dsRNA需要进行额外的退火步骤吗？

同一个PCR管中，小于800 bp的转录产物反应后会互补形成dsRNA，大于800 bp需要退火形成dsRNA。两个模板分别在不同的PCR管中转录，则需将反应结束后两个产物混合后进行退火。

10. TR102是否可以体外转录单链RNA？

TR102可以做体外转录单链RNA，TR102试剂盒比TR101试剂盒多了2个模块，即：10 x Annealing Buffer、RNase T1（RNase T1特异性降解单链RNA中的G及双链中5’端的3个G游离的碱基），去掉这几个模块，可以参照TR101的说明书操作。

这里使用TR102组份，以说明书TR101中的非修饰RNA体系配制为例：