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DNA polymerase I Klenow fragment exo-V21.1.pdf
大小：2021-11-12 17:05:32
DNA polymerase I Klenow fragment exo-
DNA Polymerase I Klenow Fragment exo-
缺失3’→5’外切酶活性的Klenow片段
双脱氧测序；随机启动标记；建库中3'末端加dA尾
· 3’末端加dA尾
· 用随机引物制备探针
· 随机引物法标记
Klenow片段(3´→5´exo-) 是DNA聚合酶I的N末端截短物，它保留了DNA聚合酶活性，但失去了5´→3´核酸外切酶活性；该酶经突变 (D355A，E357A) 进一步去除了其3´→5´核酸外切酶活性。
贮存缓冲液
25 mM Tris-HCl pH 7.4, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% glycerol
反应缓冲液 (10 × Blue Buffer)
100 mM Tris-HCl pH 7.9, 500 mM NaCl, 100 mM MgCl2, 10 mM DTT
来源
克隆有来自E.coli DNA Polymerase I Klenow Fragment exo-基因的重组E. coli菌株。
单位定义
37℃、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位 (U)。
|
组分 |
N105-01 5,000 U |
|
Klenow Fragment exo- (5 U/μl) |
1 ml |
|
10 × Blue Buffer |
2 ml |
反应缓冲液
10 × Blue Buffer
100 mM Tris-HCl pH 7.9 @ 25°C
500 mM NaCl
100 mM MgCl2
10 mM DTT
－20°C保存。
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