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VAHTS Serum-Plasma Circulating...-V21.1.pdf
大小：2021-07-09 14:30:38
VAHTS Serum/Plasma Circulating DNA Kit
VAHTS Serum/Plasma Circulating DNA Kit
游离DNA提取；产物可用于qPCR；二代测序；文库构建
· 适用于短片段cfDNA提取
· 提取纯度高，产量高，产物浓度测定准确
· 提取cfDNA覆盖度好，无偏好性，适于二代测序用建库实验
· 兼容手动提取及自动提取程序
1.适用于短片段cfDNA提取
人cfDNA为平均长度180 bp的短片段DNA，因此对较小的DNA片段回收率是评价cfDNA提取效率的关键因素。使用VATHS磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒中的磁珠提取DNA ladder（70-1000 bp区间），与原始DNA以相同稀释倍数经Agilent 2100 DNA1000芯片检测如右图所示，提取后的DNA与投入DNA重合度高，基本无DNA片段大小偏好性。
2.提取纯度高
使用VAHTS磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒提取血浆cfDNA，经Agilent 2100高敏芯片检测，线条平滑，cfDNA峰型饱满，其它位置无杂峰，显示提取的cfDNA纯度高，杂质少。使用提取的cfDNA进行用于二代测序的建库实验，建库产量高，无杂峰，更适用于二代测序检测。
3.提取产量高
与进口柱纯化游离DNA提取kit（Q）和国产柱纯化游离DNA提取kit（T）提取同一血浆样本的游离DNA，经Qubit试剂盒（Thermo Fisher）测定浓度，VAHTS 磁珠提取产量少于Q及T柱纯化产物，但经qPCR检测血浆中掺入的痕量短片段外源DNA相对投入量的比例，VAHTS磁珠提取的产量是Q柱纯化的1.5倍左右，T柱纯化的3倍以上，说明受Carrier RNA影响，通过Qubit测定的浓度不能反映实际cfDNA浓度，VAHTS磁珠法提取试剂盒实际提取效率高于传统柱纯化方式。
4.提取DNA浓度准确
传统柱纯化法受到Carrier RNA加入的影响，测定浓度时比实际值偏大，影响后续操作判断。VAHTS磁珠法提取的cfDNA浓度准确，用Qubit试剂盒定量及用KAPA gDNA绝对定量试剂盒（KAPA hgDNA Quantification and QC Kit）做QPCR的定量结果吻合度高。
5.兼容手动提取及自动提取程序
手动提取最大样本量可达16样/次，操作时间<2小时/次。由于磁珠法无需离心换管等操作，因此同样可适用于目前主流的自动核酸提取仪如KingFisher Flex Smart32游离DNA提取仪，可针对不同样品量及样品来源设定不同处理程度，简单、快速的进行大规模提取，大大降低实验者的工作量和实验中的人为误差，保证结果的稳定性和均一性。
6.cfDNA构建文库覆盖度好，无GC偏好性
使用VAHTS磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒提取cfDNA，1ng投入建库进行测序分析。测序平台为X-Ten，cfDNA PCR文库测序数据显示GC含量正常，没有偏好性；Q30在90%以上，说明测序数据质量较好；因cfDNA属于高度片段化状态，覆盖度在60-70%，属于正常范围；dup rate普遍较高，和测序平台有关；数据显示几乎没有接头残留。
VAHTS Serum/Plasma Circulating DNA Kit为基于超顺磁性的磁珠纯化技术，针对血清/血浆样本中短片段游离DNA富集定向优化的DNA提取试剂盒。超顺磁性氧化硅纳米磁珠具有分散度高、表面积大、吸附特异性好等特点，高效结合并富集DNA片段。
本试剂盒应用于从较灵活起始范围（200 μl~2 ml）的血清、血浆样品中提取高质量游离DNA，操作简单、快速，全程无有毒有机溶剂。针对低分子量核酸定向优化，具有DNA提取无偏好性、提取产量高、核酸纯度高、重复性强等优点。得到的DNA可直接用于定量PCR和二代测序等实验。兼容手动提取和自动提取流程，同时兼容无游离醛基的cfDNA采血管如Streck Cell-Free DNA BCT或VAHTS®游离DNA保存用采血管或普通EDTA采血管得到的血浆样本。
Box1,2-8℃保存;溶解后的 Proteinase K须保存于-20℃。
Box2,室温保存。
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