
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix (Without ROX)
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix( Without ROX )
模板示踪型染料法定量PCR检测试剂盒
基因表达差异分析;绝对定量分析
· 减少移液错误:通过提供不同颜色的试剂,利用移液过程中的变色效应,追踪移液过程,减少移液错误。
· 扩增高度特异:新型抗体法热启动酶Champagne Taq DNA Polymerase,配以优化的Buffer和特异性促进因子Exactor,有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生。
· 扩增性能优异:可以检测到个位数拷贝的基因表达,对目标基因定位准确、可信。
· 兼容程度:Without ROX版本, 在Lightycle 96/480、CXF96/384等仪器上可使用
1. 可实现移液过程的追踪
图1
ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix 中包含蓝色染料,而 10 × Dilution Buffer中包含黄色染料,当ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix(蓝色)中加入了用Dilution Bufior 稀释的扩增模板(黄色)后会产生蓝色→绿色的变色效应,从而可以根据体系颜色准确护病是否已加入模板。
2. 染料不影响试剂的扩增性能
图2
用ChamQ Color(Vazyme #Q411)和ChamQ (Vazyme #Q311)同时扩增75个基因,其中有3个基因Melt Cure出现杂峰,Q411和Q311表现一致。72个基因特异性良好,将该72个基因的Ct值作图比较。横坐标表示Q311扩增72个基因的Ct值,纵坐标表示Q411扩增72个基因的Ct值,根据方程y=0.9955X + 0.3367可知,在Ct值16 - 36的范围内,Q411 和Q311 扩增得到的Ct值高度一致。
3. 特异性和灵敏度平衡
图3
图A 是将pUC19 质粒进行8 个10 倍梯度稀释,图B 是根据图A 的CT 值绘制的标准曲线。第8 个梯度稀释中质粒拷贝数浓度约为5 copies/4 μl,使用ChamQ Color 预混液对各稀释梯度中的pUC19 质粒进行检测,每孔模板使用量为4 μl。可以看到,ChamQ Color 预混液在宽广的模板量区间具有优异的线性关系,可以检测出具有个位数拷贝的待测模板,灵敏度较高。
图C、D 以HeLa 细胞cDNA 为模板,使用ChamQ Color 预混液以及其他品牌染料法试剂在同样的反应条件下测试48 个随机挑选的基因,用以检测扩增特异性。统计结果显示。ChamQ Color 预混液在默认条件下能够完成超过95%(46/48)的目标基因检测,特异性较高。
4. 稳健的重复性
图4
图A是以HeLa 细胞cDNA 为模板,使用ChamQ Color 预混液以及其他品牌染料法试剂在同样的反应条件下测试48 个随机挑选的基因,用以检测扩增特异性。统计结果显示。ChamQ Color 预混液在默认条件下能够完成超过95%(46/48)的目标基因检测,特异性较高。以HeLa 细胞cDNA 为模板,用ChamQ Color 预混液检测B2M 基因的表达,设置48 孔重复,用以检测扩增稳定性。可以看到,ChamQ Color 预混液实验结果重复性较高。
图B是以HeLa 细胞cDNA 原液以及10 个两倍稀释梯度共计11 个样品为模板,使用ChamQ Color 预混液检测P450C17 基因的表达,每个模板设置6 个复孔。可以看到,ChamQ Color 预混液可以在宽广的范围内,准确分辨2 倍的模板浓度差异,且扩增高度特异。
该产品通过扩增模板加入后的变色反应,实现了加样过程的可视化,提高了加样效率。其采用的Champagne Taq DNA Polymerase是一种新型的抗体法热启动DNA聚合酶,具有兼容性广、扩增性能强、灵敏度高等诸多优点,配以针对Realtime-PCR优化的合适Buffer以及特异性促进因子Exactor,平衡了扩增特异性和扩增效率之间的矛盾。

2 x ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix:长期储存应置于-20C避光;如短期内反复使用,解冻后可于4℃避光条件下稳定存放6个月;
10 x Dilution Buffer:于-20℃保存。
4℃存放6个月;可冻融30次;Dilution Buffer稀释的cDNA可于-20℃存放7天;配置好的混合体系(引物、模板、试剂)可于4℃存放6h。

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