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    P621说明书-V22.1.pdf

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    2022-05-27 10:04:18
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Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

用于单细胞或微量总RNA中转录组的扩增
价格：
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2170.0
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元
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货号：
P621-01
所属分类
单细胞预扩增
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-
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Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

用于单细胞或微量总RNA中转录组的扩增

单细胞或微量总RNA中转录组扩增；2 - 1,000个细胞的一步扩增

·  适用于1-1000个细胞

·  一步法RT-PCR预扩增

·  可扩增500个靶基因

·  扩增产物适合用任何实时荧光定量PCR仪分析

·  高灵敏度，低成本

Single Cell Squence Specific Amplification Kit 是基于一步RT-PCR的扩增方法，实现单细胞或者微量总RNA中转录组的扩增，检测单个细胞之间不同基因的表达水平。本试剂盒实现了细胞裂解、RNA逆转录和PCR反应在同一管内完成，不需要额外的移管操作，具有节约时间、减少实验误差、降低污染、提高灵敏度等优势。

-30 ~ -15℃保存。-20 ~ 0℃运输。

关键词:
P621
单细胞扩增
单细胞转录组扩增
转录组扩增
RNA转录组扩增
单细胞RNA扩增
微量RNA转录组扩增
单细胞定量
单细胞RT-PCR
单细胞PCR
单细胞一步法RT-PCR预扩增
逆转录；反转录；RT-PCR
未找到相应参数组，请于后台属性模板中添加

Q1：5μl反应体系加入多少样本的体积？

A1：5μl的反应体系下，加入的样本体积最好不要超过0.5μl，如果样本体积较大，建议适当增大反应体系。

 

Q2：整个体系能否减半？

A2：可以，但是不建议，一步法体系较为复杂，大体系做效果更好。

 

Q3：可以适用于一个细胞的定量吗？检测的基因数量最多可以达到多少？会不会造成扩增偏好性？

A3：单细胞是可以的，亦可用于2-1000 cells或10 pg-100 ng RNA的样品；最多可混合500对不同基因的扩增引物；关于扩增偏好性，只要根据细胞数控制好循环数，不会造成偏好性。

 

Q4：样本不是分散开的细胞，而是一小块组织，可不可以用呢？组织是否可用裂解液进行裂解细胞？

A4：可以的，但是组织块不能太大，大约有几十个细胞量的组织块是可以的，但是超过这个范围，目前还没有案例。该产品反应体系只有5μl，不兼容细胞裂解液，大量的裂解液会影响反应的进行，可以将组织进行液氮速冻，直接投入到反应体系即可。

 

Q5：引物可以使用Oligo dT或随机引物吗？

A5：不可以，因为该产品是RNA提取纯化、逆转录和PCR反应在同一管内完成，如果使用Oligo dT或随机引物无法达到预扩增的目的。

 

Q6：引物设计有何要求。

A6：(1) 除了要符合常规的PCR引物设计要求外，还要跨内含子设计引物。

(2) 如果引物池存在2对以上的引物时，退火温度建议都是60℃左右。

 

Q7：逆转录时间设置为60 min，时间太长，是否可以缩短？退火、延伸这一步骤15 min，循环数20，可以把延伸时间和循环数调节一下？

A7：逆转录时间与扩增的基因数目也有关，最保险的是使其进行充分的逆转录，60 min可以保证充分逆转。延伸时间可以根据后期要测试的基因数量进行调节，这里设置的15 min，是为了彻底逆转500个基因，后续客户可根据细胞/RNA投入量进行调节；循环数20也是可以根据样本细胞量进行调节的。

 

Q8：PCR预扩增结束后的产物先稀释了5倍，然后再稀释10倍，为什么要这样做呢？为什么不一步稀释到位呢？低丰度，高丰度的基因都是稀释50倍吗？

A8：稀释5倍是作为储存液，再稀释10倍作为工作液。稀释的倍数是可以根据基因的表达量和样本量进行调整的，所以最好提前做个预实验判断一下。

 

Q9：配置好RT-PreAmp Master Mix后，冰上可以放置多长时间？

A9：放置时间越短越好，测试过冰上放置5 min左右没有问题。

Sheng X, Liu C, Yan G, et al. The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals. EBioMedicine. 2022, 75: 103790. PMID:34974310 (IF:11.205)

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ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix
1200.00
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix
1200.00
Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix
1200.00
Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix
1200.00
2 × Taq Master Mix (Dye Plus)
210.00
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210.00
2 × Phanta Flash Master Mix(Dye Plus)
615.00
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