
HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)
HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)
第三代高效cDNA 一链合成试剂盒(去基因组)
逆转录;第一链cDNA合成(含gDNA去除); PCR;qPCR
· 优异的逆转录灵敏度:兼容低起始量及降解RNA模板
· 优异的逆转录性能:cDNA合成长度可至20kb
· 高杂质耐受度:在常见杂质存在条件下(乙醇、异丙醇、水平衡酚等)仍能保持高效的逆转录性能
· 灵活选择引物: 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物
· 带有基因组去除模块:可有效清除高达500 ng基因组DNA
1.后续实验为PCR
以1μg HeLa细胞RNA为模板,按照R302说明书推荐体系进行逆转录,以1μl cDNA为模板,用2 × Vazyme Lamp Master Mix (Dye Plus)(Vazyme #P312)进行长片段扩增,将得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果如图1所示:扩增条带单一且产量高

图1.长片段扩增电泳图
注:M:DL15000 Marker(Vazyme #MD103)
2. 后续实验为qPCR
以100 ng HeLa 细胞 RNA为模板,使用 HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R312) 以及其他逆转录产品,按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR定量分析。以不同公司产品为横坐标,△CT (△CT = Vazyme #R312 cDNA扩增CT值–各公司逆转录产品 cDNA 扩增CT值)为纵坐标绘图。从图中可以看出,除一些体系Th1△CT>0外,其余逆转录产品均△CT<0,说明 Vazyme #R312逆转录效率优于相关逆转录产品。
HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)的升级版本,包含新一代逆转录酶HiScript III Reverse Transcriptase和针对逆转录优化的合适Buffer,进一步提高了一链合成的效率。该试剂盒中的5 × gDNAwiper Mix可在42℃,2 min条件下快速去除基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠,并可简化qPCR引物设计,无需跨内含子设计引物。试剂盒中包含单组分逆转录引物Oligo (dT)20VN和Random hexamers,用户可根据需要,灵活选择逆转录引物进行后续实验。本试剂盒既可合成用于克隆等下游实验的全长cDNA (可达20 kb),亦可合成高度均一的用于qPCR定量的cDNA。
- 30℃~- 15℃保存。

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