搜索
搜索

科技成就健康生活

 

产品
/
/
/
/
HiScript III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

科研试剂

高通量试剂

药物研发试剂

分子诊断试剂

动物疫病诊断

产品分类
  • cp

    R323说明书-V22.1.pdf

    大小:
    2022-05-27 15:53:37
1/1
浏览量:
13662

HiScript III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

HiScript®IIIRTSuperMixforqPCR(+gDNAwiper)更高效的两步法RT-qPCR预混液(去基因组)简便快捷的操作:5×HiScriptIIIqRTSuperMix包含逆转录反应所需的所有组分,只需加入模板RNA,20min内即可完成逆转录反应广泛的模板兼容性:可兼容不同物种,完整度较差的RNA模板超强的杂质耐受度:对于逆转录常见杂质如乙醇、异丙醇、水平衡酚、异硫氰酸胍
价格:
¥
1683.0
市场价
1683.0
浏览量:
13662
货号:
R323-01
数量:
-
+
库存:
9995
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
产品详情
FAQ
组分
说明书

HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

更高效的两步法RT-qPCR预混液(去基因组)

简便快捷的操作:5 × HiScript® III qRT SuperMix包含逆转录反应所需的所有组分,只需加入模板 RNA,20 min内即可完成逆转录反应

广泛的模板兼容性:可兼容不同物种,完整度较差的 RNA 模板

超强的杂质耐受度:对于逆转录常见杂质如乙醇、异丙醇、水平衡酚、异硫氰酸胍、腐殖酸等,具有超强的耐受度

卓越的逆转录效率:与常见市售逆转录产品相比,HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 逆转得到的cDNA定量CT值最小,具有卓越的逆转录效率

1.简便快捷的操作

HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)(Vazyme #R323)包含基因组清除模块,可彻底去除 RNA 模板中残留的基因组 DNA;同时Vazyme #R323 包含逆转录反应所需的所有组分,只需加入模板 RNA,20 min 内即可完成逆转录反应,操作简便快捷。

2.广泛的模板兼容性

分别以 HeLa 细胞、小鼠肝脏、拟南芥叶片的完整 RNA 与降解 RNA 为模板,使用 HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme#R323)以及市售常见品牌逆转录试剂 (Supplier T) 进行逆转录。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR 定量分析,以不同基因为横坐标,扩增 CT 值为纵坐标绘图,比较不同产品的逆转录效率。从图中可以看出,以 HeLa 细胞、小鼠肝脏、拟南芥叶片完整 RNA 以及降解 RNA 为模板进行逆转录定量,Vazyme #R323的扩增CT 值小于或等于T公司相关产品,说明Vazyme #R323逆转不同物种RNA、完整度较差的RNA模板皆具有卓越的逆转录效率。

3. 超强的杂质耐受度

在RNA的提取过程中常常因操作或样本的特殊性导致RNA中混有有机试剂或杂质,这些物质的残留会严重影响逆转录效率。乙醇、异丙醇、水平衡酚、异硫氰酸胍、腐殖酸是 RNA 提取过程中较为常见的杂质,测试其对逆转录效率的影响。

分别对上述 5 种杂质设置 3 个不同浓度梯度,添加至 HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 逆转录体系中,将得到的 cDNA 进行 qPCR 检测。以不同浓度杂质为横坐标,△CT  (△CT = 含杂质逆转录 cDNA 扩增 CT 值 – 未含杂质逆转录 cDNA 扩增 CT 值 ) 为纵坐标绘图。从图中可以看出,△CT 均小于 0.15,说明 Vazyme #R323 对上述 5 种常见杂质具有极强的耐受度。

4. 卓越的逆转录效率

以 100 ng HeLa RNA 为模板,使用 HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 以及市售其他逆转录产品 ( 分别来自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti),按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR 定量分析。以不同公司产品为横坐标,△CT (△CT = Vazyme #R323 cDNA 扩增 CT 值 – 各公司逆转录产品 cDNA 扩增 CT 值 ) 为纵坐标绘图。从图中可以看出,除一些体系Th1 △CT >0 外,其余公司逆转录产品均△CT <0,说明 Vazyme #R323 逆转录效率优于 Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相关逆转录产品。

   

HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)为HiScript® II二代产品的升级产品,包含全新升级三代逆转录酶 HiScript® III Reverse Transcriptase与针对逆转录特殊优化的最适 Buffer,进一步提高了cDNA合成效率。本产品包含基因组清除模块,可彻底去除 RNA 模板中残留的基因组 DNA,确保后续定量结果更加真实可靠。与此同时,本产品将所有逆转录反应所需组分融于一管,只需加入模板 RNA,20 min 内即可完成逆转录反应,同时终止gDNA wiper作用,保证cDNA的完整性,并减少操作步骤,有效防止在操作过程中带来的污染。

- 30℃~- 15℃保存。

关键词:
gdna
逆转录
rna
ct
hiscript
iii
产品
模板
杂质
qpcr
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:如何评判RNA质量

A1:RNA质量从两个方面进行检测:

⑴ RNA完整度。通过琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整度。以真核生物为例,完整的总RNA有清晰的三条带,分子量从大到小分别为28S、18S、5S,并且28S是18S亮度的两倍;若能看见三条带,但带型模糊或弥散,则说明RNA有部分降解,此时请立即进行逆转录反应,并适量加大模板量;若只能看见分子量很小的一条带或没有条带,则RNA 已完全降解,需要重新提取

⑵ RNA的纯度。RNA的纯度可以通过测定OD260/280和OD260/230两个比值,在1.8-2.1范围内表示纯度较高。

注:建议使用1%的琼脂糖凝胶,210V电泳10-12min;加好loading后的RNA可以放置在PCR仪上70℃,2min,使RNA变性后再进行电泳,这样跑出来的RNA条带更好看,也更能反应RNA的完整性;

 

Q2:如何选择逆转录的引物

A2:逆转录三种引物:

⑴ 随机引物:随机结合在RNA的任何区域,适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA类型的逆转录反应。

⑵ Oligo dT:适用于具有PolyA尾的RNA(原核生物RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有PolyA尾)。 由于Oligo dT结合在PolyA尾上,所以对 RNA 样品的质量要求较高,即使有少量的降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

⑶ 基因特异性引物:与模板序列互补,适用于序列已知的基因逆转录。

引物选择依据: cDNA后续进行PCR扩增长片段,一般用Oligo dT或者基因特异性引物,不建议使用随机引物,因为随机引物是随机结合的,cDNA片段会偏短;cDNA后续进行qPCR,一般使用Oligo dT和随机引物的混合物,可以避免3’端的扩增偏好性。

 

Q3:对于逆转录加样的操作注意事项

A3:⑴ 4 × gDNA wiper Mix、5 × HiScript III qRT SμperMix及5 × No RT Control Mix含有高浓度的甘油,在使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吸打充分混匀后准确吸取。

⑵ 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的Total RNA。如果目的基因表达量非常低,最多加入5 µg total RNA,否则加入RNA量过高, 可能会超出后续定量PCR的线性范围。

⑶ 可以不进行基因组去除步骤,直接用逆转录试剂进行逆转录,但是请勿将4 × gDNA wiper Mix与不含基因组去除模块的试剂配套使用(如与R222配套使用),因为不含基因组去除模块的试剂盒中的Mix不含终止gDNA wiper反应的成分,有可能会影响cDNA稳定性。

 

Q4:可以通过检测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗?

A4:不可以,逆转录产物cDNA是混合物,除了cDNA产物以外,还有bμffer、逆转录酶、引物,同时还包含未转录的模板RNA,总RNA中的tRNA、rRNA等,都会干扰浓度测定结果,因此不能反应真实的cDNA产量;cDNA同样不可以纯化,因为逆转得到的cDNA长短不一,纯化会损失短的cDNA。

 

Q5:cDNA模板需要稀释吗?应该稀释多少倍进行定量?

A5:没有具体的稀释参考倍数,一般cDNA每稀释10倍CT值变大3.3,可以根据这个规律进行合适的稀释。可以使用cDNA原液、10倍稀释液、100倍稀释液作为模板进行定量实验,根据规律选择CT值落在18-28范围内的稀释倍数。也可以参考换试剂之前的稀释倍数。

注:当使用 cDNA 原液进行检测的时候,使用量不能超过qPCR 反应体系的 1/10,因为 cDNA 中包含很多抑制 qPCR 的组分,cDNA 体积大时风险很高。

 

Q6:逆转录试剂盒可以用于lncRNA和cirRNA吗?

A6:可以,和普通的RNA逆转类似。不过lncRNA比较长,建议在去除基因组步骤前先进性65℃ 5min预变性,打开二级结构再进行逆转录。并不是所有的LncRNA都包含PolyA 尾,所以如果使用逆转录试剂盒,可以同时添加随机引物与OligodT两种引物,或者只添加随机引物一种引物,但不能只添加Oligo dT一种引物。

cirRNA为环状闭合结构,没有poly A尾,逆转录时只加随机引物。cirRNA长度跨度较大,比较长的话建议跟lncRNA一样先预变形,正常的话就按照正常程序就行了。

关于引物的选择,总的来讲:

mRNA可以选用随机引物+OligodT;随机引物;OligodT;GSP(基因特异性引物);

cirRNA可以选用随机引物;GSP(基因特异性引物);

LncRNA可以选用随机引物+OligodT;随机引物;GSP(基因特异性引物);LncRNA在进行逆转录之前需要进行RNA预变性。

 

Q7:与二代逆转录产品相比,三代逆转录产品的优势是什么?

A7:(1)与二代产品相比,三代酶CT值偏小1-2 Cycles;

       (2)三代产品对于降解的RNA逆转录效率高,可逆转Rin=2.5的RNA;

       (3)在高RNA模板(1-5 μg)投入的情况下,依然具有很高的逆转录效率;

       (4)对乙醇、异丙醇、酚、异硫氰酸胍(RNA提取中引入的杂质)等常见杂质耐受度极高。

这是描述信息
上一页
1

售后服务   服务流程   |   订购流程   |  真伪查询

邮  箱  sales@vazyme.com (销售咨询)
support@vazyme.com (技术支持)
marketing@vazyme.com (市场推广)

举报电话  025-83700665

举报邮箱   jubao@vazyme.com

微信公众号

扫码关注

 地 址:江苏省南京经济技术开发区科创路红枫科技园C2栋   电话:400-600-9335  网站建设: 中企动力 南京

搜索
搜索