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RNA-easy Isolation Reagent

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R701中文-PDF单页-V22.1.pdf

大小：

2022-01-21 17:08:41

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浏览量:

4294

RNA-easy Isolation Reagent

常温总RNA提取试剂，从此氯仿是路人

价格：

600.0

市场价

元

600.0

浏览量:

4294

货号：

R701-01/02

所属分类

沉淀法提取

数量：

库存:

19991

*具体价格咨询当地业务员

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产品详情

FAQ

组分

说明书

相关文献

RNA-easy Isolation Reagent
常温总RNA提取试剂，从此氯仿是路人

RNA提取；产物可用于cDNA克隆；qRT-PCR检测；mRNA纯化；体外翻译；Northern blotting杂交；高通量测序

· 操作简便：单相提取，无需多相分层，并且全程可在室温进行操作

· 兼容性广：广泛适用于各类动植物和微生物样品，轻松应对各类培养细胞

· RNA质量高：RNA纯度高，完整度好，产量媲美传统Trizol法提取

· 安全低毒：无需使用氯仿、β-巯基乙醇等有毒有害试剂

1.操作体验好

2.兼容范围广

RNA-easy Isolation Reagent （Vazyme #R701）广泛适用于从各类动物组织、植物组织、培养细胞和微生物等样品中提取Total RNA和Small RNA。

如上图展示，分别使用Vazyme #R701与市售Trizol产品（来自T、Ta、Ti公司），按照各自说明书对小鼠肝脏（25mg）、玉米叶（20mg）和HEK293细胞（2 × 106 个）的进行总RNA提取，并对最终获得的RNA产物（1μg）进行琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出，Vazyme #R701 提取RNA质量高，与T公司和Ta公司的Trizol处于相同水平。

3.RNA产量高

针对上述获得的RNA产物使用Onedrop测定其浓度，如上图所示，Vazyme #R701针对肝脏和玉米（叶）提取RNA产量与T公司和Ta公司处于相同水平，且超过Ti公司；针对HEK293细胞， Vazyme #R701提取产量高（与T公司相比，P 值<0.001 ）。

4.RNA质量高

如上图展示，分别使用Vazyme #R701与市售Trizol产品，按照各自说明书对HEK293细胞（2 × 106 个）进行总RNA提取，并对获得的RNA产物使用Onedrop测定OD260/280比值, 以及Agilent 2100 Bioanalyzer进行RNA完整度分析。从图中可以看出，Vazyme #R701 提取的RNA完整度好，纯度与Th公司和Ta公司处于相同水平，超过Ti公司（P 值=0.0077）。

RNA-easy Isolation Reagent 广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞和微生物等样品中提取Total RNA和Small RNA。与传统Trizol提取方法相比，本产品使用方法简单，不需要使用氯仿进行分层，且全程可在常温进行；此外，本产品在高效地抑制RNA酶(RNase)活性的同时，将蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀到管底，从而实现单相提取，并有力保证了RNA的完整度和纯度。使用本产品在50 min内即可完成全部的提取过程，提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

2~ 8℃保存。

关键词:

R701

总RNA提取；室温总RNA提取；细胞RNA提取；动物组织RNA提取；核酸提取；沉淀法提取；RNA提取；微生物RNA提取；Total RNA提取；Small RNA提取；植物组织RNA提取；RNA常温提取；单相RNA提取；RNA提取

Q1：RNA发生降解

A1：RNA降解可能发生在多个环节，实验过程中需要注意以下事项：

（1）确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase污染，所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNase污染，耐高温器物可于150℃烘烤4 - 6 h以去除RNase，其它器物去除可用0.1%的DEPC水浸泡过夜；

（2）做好防护工作，戴口罩和一次性干净手套，并在单独的洁净区操作；

（3）细胞或组织样品需立即加入RNA-easy，并迅速进行匀浆裂解。若处理不当，发生细胞或组织冻融，RNase会被释放出来降解RNA。针对内源RNase含量高或不易匀浆的组织，需将组织切成小块后立即投入液氮冷冻，然后进行研磨，在整个研磨过程中，样品不得融化；

（4）提取的RNA样品需要妥善保存，建议取少量进行检测，其余样品分装保存-85 ~ -65℃。进行电泳检测可以提高电压并缩短跑胶时间，同时对电泳缓冲液进行冰浴降温，防止跑胶过程中RNA发生降解。

Q2：提取的RNA有污染

A2：（1）蛋白质污染：采用分光光度计检测提取产物OD260/OD280偏低时，提示可能存在蛋白质污染。遇到此种情况，需要考虑是否组织投入量过大，导致裂解不充分，可以适当增加RNA-easy或者降低组织投入量进行提取；

（2）多糖污染：采用分光光度计检测提取产物OD260/OD230偏低时，提示可能存在多糖污染，需要考虑是否是因为乙醇未去除干净或者是组织投入量过大导致，此时，可以在07-2步骤8时适当对RNA沉淀进行晾干或者适当降低组织投入量进行提取操作；

（3）脂肪污染：处理脂肪含量丰富的组织时，经过07-2步骤2之后，上层是大量脂肪，可以转移澄清中间层进行下一步操作。

Q3：加入异丙醇离心后看不见沉淀

A3：通常情况下，经过异丙醇沉淀可以看见白色胶状沉淀。若遇到沉淀不可见的情况，可能是RNA含量低或者组织投入量过低，建议加入异丙醇(07-2步骤4)后在2 ~ 8℃或-30 ~ -15℃放置10 - 30 min后再离心；且在07-2步骤5进行弃上清操作时，请采用吸取而不是倾倒的方法，以免沉淀丢失。此外，部分组织材料由于含有较多的代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请小心弃去上清，经过75%乙醇清洗RNA沉淀之后，白色团块状沉淀会更加聚集和明显。

Q4：如何保存组织样本

A4：如果不能立刻提取RNA，应将组织离体后迅速投入液氮冷冻，并用液氮保存；或液氮速冻后，转移至-85 ~ -65℃保存。不能直接将新鲜组织放在-85 ~ -65℃冷冻，因为样品的冻结是一个缓慢的过程，在这个过程中内源RNase会将RNA降解。此外，针对不具备液氮速冻条件的情况，可将新鲜组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中，在室温可存放一周，2 ~8℃存放一个月，或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃长期保存。

Q5：RNA-easy可以适用于什么组织/细胞样本

A5：RNA-easy与传统Trizol一样属于通用型total RNA提取试剂，具有广泛的物种和组织/细胞兼容性。RNA-easy 针对常规动物组织(如：肝脏、心脏、肾脏、脑组织、骨骼肌等，不包括脾脏和肺脏)、植物组织(如水稻、玉米、拟南芥、烟草、小麦、大豆等，不包括棉花)、各类细胞系均具有极佳的提取效果。

Q6：R701提RNA时把异丙醇错加成无水乙醇还有办法补救吗

A6：建议接着往下做，可以正常提出RNA。

Q7：从外周血提取的细胞可以用R701提RNA吗

A7：不是全血，而是单纯的血细胞的话，可以尝试。

Q8：R701六孔板的细胞培养皿一般加多少试剂量

A8：六孔板，一般每孔加500µL R701。

Q9：R701客户全程冰上操作可以吗

A9：可以的。

Q10：R701与普通的trizol法（R401）有什么不一样

A10：（1）R701无需氯仿，直接加入RNase-free ddH2O，安全无毒，且容易获得；

（2）传统Trizol法用氯仿抽提后分层，吸取含RNA的上层水相要特别小心避免吸到中下层的DNA和蛋白质；R701则没有分层抽提步骤，可以直接吸取含RNA的上清；

（3）常温操作即可，无需4度环境；