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    CCK-8 Cell Counting Kit-V21.1.pdf

    大小:
    2021-10-11 13:24:02
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CCK-8 Cell Counting Kit

CCK-8CellCountingKit精准、快速的蛋白定量试剂操作简便:即开即用,无需配制其他试剂灵敏度高:灵敏度、线性相关性高,重复性好以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板,单组三个复孔设9个细胞数梯度,每组细胞数分别为:0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔,进行CCK-8、WST-1、MTT法比较,实验结果表明CCK-8法灵敏度高,线性范
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A311-01/02
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说明书

CCK-8 Cell Counting Kit

精准、快速的细胞增殖和细胞毒性检测试剂

操作简便:即开即用,无需配制其他试剂

灵敏度高:灵敏度、线性相关性高,重复性好

细胞毒性低

以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板,单组三个复孔设9个细胞数梯度,每组细胞数分别为:0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔,进行CCK-8、WST-1、MTT法比较,实验结果表明CCK-8法灵敏度高,线性范围宽。

 

以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板,单组三个复孔设9个细胞数梯度,每组细胞数分别为:0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔,以细胞数量对吸光值绘制标准曲线,与其他公司同类产品相比,CCK-8 Solution相关性为R2 > 0.99。

CCK-8 Cell Counting Kit, 简称CCK-8 试剂盒, 是依赖于WST-8 (2-(2- 甲氧基-4- 硝苯基)-3-(4- 硝苯基)-5-(2,4- 二磺基苯)-2H- 四唑单钠盐) 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合载体1-Methoxy PMS 的作用下可被线粒体内的一些脱氢酶还原成高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan),生成的甲臜的颜色深浅与细胞增殖成正比,与细胞毒性成反比。

使用酶标仪在450 nm 波长处测得吸光值,该测定值可间接反映活细胞的数量。本试剂盒的CCK-8 Solution 为即用型试剂, 可直接加入到细胞样品中,孵育一定时间后即可检测,不需要预配各种成分。

组   分

A311-01 500 rxn (10 μl/rxn)

A311-02 1000 rxn (10 μl/rxn)

CCK-8 Solution

5 ml

10 ml

4℃避光保存

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:待测药物本身具有氧化性或还原性时,如何进行操作?

A1:如果待测药物本身具有氧化性或还原性,可在加入CCK-8 Solution 之前更换新鲜的培养基,以去除待测药物的影响。当待测药物影响比较小时,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

 

Q2:实验过程中,处理细胞用的不是96孔板,如何确定加入CCK-8 Solμtion 的体积?

A2:CCK-8 Solution 的加入量是细胞板中每孔的培养基体积的10%,按照该比例进行换算即可。如果是使用384孔板进行细胞增殖与活性的检测,建议先将CCK-8 Solution 用ddH2O 稀释1倍后,加入细胞板中每孔培养基的20% 体积即可。

 

Q3:测得的吸光值很低,如何解决?

A3:(1)增加细胞数量

(2)延长加入CCK-8 Solution 后孵育的时间(一般是1-4h)。

 

Q4:空白对照(培养基+CCK8)检测出来吸光度值在1以上,实验组检测出来吸光度值在2左右,什么原因导致空白对照检测出来的吸光值在1以上?

A4:(1)正常情况下,空白对照的吸光度值仅在0数值范围,测出来数值偏大

可能是培养基造成的原因,实验时可去掉培养基对照的本底值;另外一个原因可能是体系中存在污染;

(2)污染可先检查培养基,可通过显微镜观察培养基是否染菌;

(3)若是染菌,可更换新的培养基,或者使用0.22 μm/0.45 μm的滤膜过滤,除去细菌的影响。

 

Q5:做完第二步铺完细胞后需要放置24h等贴壁后再加入溶液吗?

A5:不需要,直接加入CCK8孵育1-4h,然后检测。

 

Q6:细胞活力的数据分析(细胞活力% = (加药细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD) × 100%),每个浓度只有一个活力值(各复孔取平均值),还是有多少个复孔就有多少个细胞活力(每一个复孔算一个活力)?

A6: 建议有多少个复孔就有多少个细胞活力(每一个复孔算一个活力),方便做bar值分析。

 

Q7:接种至96 孔细胞板中的细胞数量应该是多少

A7:贴壁细胞至少1000个/孔(100 μl培养基),白细胞至少2500个/孔(100 μl培养基)。建议实验前设定几个不同细胞数量的孔进行条件摸索。

 

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