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    CCK-8 Cell Counting Kit-V21.1.pdf

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    2021-10-11 13:24:02
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CCK-8 Cell Counting Kit

准确、快速的细胞增殖和细胞毒性检测试剂
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625.0
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625.0
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货号：
A311-01/02
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细胞增殖检测
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CCK-8 Cell Counting Kit

准确、快速的细胞增殖和细胞毒性检测试剂

检测细胞的活力；细胞增殖测试；细胞毒性分析

· 操作简便：即开即用，无需配制其他试剂
· 灵敏度高：灵敏度、线性相关性高，重复性好
· 细胞毒性低: 对细胞毒性低，不影响后续实验

以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板，单组三个复孔设9个细胞数梯度，每组细胞数分别为：0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔，进行CCK-8、WST-1、MTT法比较，实验结果表明CCK-8法灵敏度高，线性范围宽。

 

以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板，单组三个复孔设9个细胞数梯度，每组细胞数分别为：0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔，以细胞数量对吸光值绘制标准曲线，与其他公司同类产品相比，CCK-8 Solution相关性为R2 > 0.99。

CCK-8 试剂中含有 WST-8（水溶性四唑盐）在电子载体1-Methoxy PMS 的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙色甲臜产物，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比，使用酶标仪在450 nm 波长处测得的吸光值即可间接反映活细胞的数量。本产品可广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测，是一款快速、高灵敏度、无放射性的检测试剂。

4℃避光保存

关键词:
A311
CCK-8；CCK-8检测细胞增殖；细胞增殖检测；细胞毒性检测；细胞活性检测；CCK-8细胞增殖检测；CCK；CCK8；细胞分析；细胞健康检测
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Q1：待测药物本身具有氧化性或还原性时，如何进行操作？

A1：如果待测药物本身具有氧化性或还原性，可在加入CCK-8 Solution 之前更换新鲜的培养基，以去除待测药物的影响。当待测药物影响比较小时，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

 

Q2：实验过程中，处理细胞用的不是96孔板，如何确定加入CCK-8 Solμtion 的体积？

A2：CCK-8 Solution 的加入量是细胞板中每孔的培养基体积的10%，按照该比例进行换算即可。如果是使用384孔板进行细胞增殖与活性的检测，建议先将CCK-8 Solution 用ddH2O 稀释1倍后，加入细胞板中每孔培养基的20% 体积即可。

 

Q3：测得的吸光值很低，如何解决？

A3：（1）增加细胞数量

（2）延长加入CCK-8 Solution 后孵育的时间（一般是1-4h）。

 

Q4：空白对照（培养基+CCK8）检测出来吸光度值在1以上，实验组检测出来吸光度值在2左右，什么原因导致空白对照检测出来的吸光值在1以上？

A4：（1）正常情况下，空白对照的吸光度值仅在0数值范围，测出来数值偏大

可能是培养基造成的原因，实验时可去掉培养基对照的本底值；另外一个原因可能是体系中存在污染；

（2）污染可先检查培养基，可通过显微镜观察培养基是否染菌；

（3）若是染菌，可更换新的培养基，或者使用0.22 μm/0.45 μm的滤膜过滤，除去细菌的影响。

 

Q5：做完第二步铺完细胞后需要放置24h等贴壁后再加入溶液吗？

A5：不需要，直接加入CCK8孵育1-4h，然后检测。

 

Q6：细胞活力的数据分析（细胞活力% = (加药细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD) × 100%），每个浓度只有一个活力值（各复孔取平均值），还是有多少个复孔就有多少个细胞活力（每一个复孔算一个活力）？

A6: 建议有多少个复孔就有多少个细胞活力（每一个复孔算一个活力），方便做bar值分析。

 

Q7：接种至96 孔细胞板中的细胞数量应该是多少

A7：贴壁细胞至少1000个/孔(100 μl培养基)，白细胞至少2500个/孔(100 μl培养基)。建议实验前设定几个不同细胞数量的孔进行条件摸索。

 

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