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    ExFect Transfection Reagent-V21.2.pdf

    大小:
    2021-09-08 13:57:34
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2986

ExFect Transfection Reagent

Exfect® TransfectionReagent低毒性的高分子聚合物转染试剂对多种细胞均有很好的转染效果,结果重复性好低细胞毒性培养基可含或不含血清,可以用PBS或无血清培养基稀释质粒,转染过程中不需换液 图1.绿色荧光蛋白表达情况使用本品及商用lipofectamine系列产品转染pEGFP-C1质粒至HEK293、HepG-2、MCF-7、NIH3T3、HCT-116、WRL-68、A5
价格:
¥
1680.0
市场价
1680.0
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货号:
T101-01/02
所属分类
细胞转染
数量:
-
+
库存:
19997
*具体价格咨询当地业务员
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说明书

ExFect® Transfection Reagent

低毒性的高分子聚合物转染试剂

对多种细胞均有很好的转染效果,结果重复性好

低细胞毒性

培养基可含或不含血清,可以用PBS 或无血清培养基稀释质粒,转染过程中不需换液

图1.绿色荧光蛋白表达情况

使用本品及商用lipofectamine 系列产品转染pEGFP-C1 质粒至HEK293、HepG-2、MCF-7、NIH3T3、HCT-116、WRL-68、A549 以及HeLa 细胞24 h 后,绿色荧光蛋白表达情况。所有转染均在24 孔板中进行,转染质粒量为1 μg/ 孔。

ExFect® Transfection Reagent 是一种基于生物可降解的高分子树枝状聚合物的转染试剂,适用于多种细胞的DNA 转染。由于所使用的活化树枝状聚合物具有均一的大小和确定的形状,因此可实现高重复性的转染结果。ExFect® Transfection Reagent 携带DNA 进入细胞后,可迅速释放DNA,并被快速降解,极大的降低了对细胞的毒性。转染试剂-DNA 复合物可以直接加入完全培养基中,血清和抗生素不影响其转染效果,转染前后都不需要更换培养基,操作十分简便。

组分

T101-01

T101-02

ExFect® Transfection Reagent

1 ml

4 × 1 ml

4-8°C 保存,不可冷冻。

关键词:
T101-01/02
Exfect® Transfection Reagent
低毒性的高分子聚合物转染试剂
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Q1:转染效率偏低

A1:(1)Exfect2000 与DNA 的比例、DNA 用量不合适

通过预实验测试ExFect2000 与DNA 的最佳比例( 在1~3 μl Exfect2000/μg DNA 范围内尝试) 及DNA 的使用量( 以24 孔板为例,在0.5~1 μg/ 孔范围内尝试后,如不能满足要求,可适当提高DNA 用量)。在后续的实验中选择转染效率高、细胞毒性低的比例进行转染;

(2)将Exfect2000 和DNA 原液直接混合后加到培养基中

Exfect2000 和DNA 需分别在无血清培养基条件下按一定比例稀释后再进行混合孵育;

(3)转染时细胞密度不合适

多数情况下,当细胞汇合度达到60%~80% 时转染效率较高。但是细胞类型不同,最适的转染密度也不尽相同。推荐通过预实验寻找较优化的转染密度,并在后续实验中保持这个密度;

(4)DNA 质量偏低( 降解或包含内毒素)

为实现高效率、低毒性的转染,应使用高质量的DNA( 高纯度、无菌、无内毒素);

(5)Exfect2000/DNA 复合物的包装体系中含有血清

若包装反应体系中存在血清,转染试剂/DNA 复合物将无法正常形成;

(6)转染体系中存在转染抑制因素

当转染体系中存在多聚阴离子聚合物时( 例如:硫酸葡聚糖、肝素等) 转染将无法正常进行。因此应避免上述物质存在于细胞转染体系中;

(7)细胞状态偏差

传代次数太少或者太多都将导致细胞转染效率的改变。为了提高转染效率以及转染稳定性,应尽量使用传代适度的细胞系,并尽量在平行实验时保持细胞传代次数的一致性。

(8)  注意观察试剂是否结冰,结冰后转染效率会变差。

 

Q2:转染过程中细胞大量死亡。

A2:(1) 如果细胞不在说明书标注范围内,可查阅历年文献,根据文献中选择的转染试剂进行选择(阳离子聚合物/阳离子脂质体)。

(2) 考虑质粒基因带毒,用GFP质粒进行阳性对照,确定转染试剂是否无问题。

(3) 如果重复数次毒性仍然较大,建议降低DNA与转染试剂的比例或用量。进行摸索。

(4) Exfect/DNA复合物转染时间过长。

多数情况下,在完全培养基中进行转染,24 h无需换液处理,但是培养时间过长可能会导致细胞状态较差,建议根据实验需要,合理安排后续实验时间。

(5) 转染时细胞密度不合适。

多数情况下,当细胞汇合度达到70%~80%时转染可以取得较高的转染效率。如果是生长非常快的细胞,如293t,密度可以降低至60%。细胞密度过低导致细胞生长缓慢,细胞对外来试剂变得较为敏感。细胞密度过高,会导致细胞发生接触抑制,加快细胞凋亡。

(6) Exfect/DNA过量。

转染试剂过量会导致较高的细胞毒性。尝试降低转染试剂的使用比例或者减少用量。

(7) Exfect/DNA复合物加入培养基时分布不均匀。

局部转染试剂/DNA复合物浓度过高是导致细胞毒性偏高最常见的原因之一。应在孔中不同位置滴加复核并,并在复合物添加到培养基之后,立即平置培养皿,并前后、左右交替晃动。

(8) 细胞状态偏差。

传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂毒性敏感度的改变。因此应尽量使用适度传代的细胞系,降低细胞代数差异对实验结果造成的影响。

 

Q3:如何验证转染效率?

A3:(1)可在质粒上插入一个GFP绿色荧光蛋白基因,或者连入化学发光标记,以荧光强度来侧面反映质粒的转染效率;

(2)可在转染的同时,另做1-3个孔的GFP质粒转染(载体需与目的基因连接的载体相同);

(3)如果想要精确的结果,可以提取转染后细胞内的基因组,用qPCR定量目的基因;

 

Q4:试剂是否可以转染RNA、siRNA?

A4:不可以。

 

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