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FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2

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    FastPure Cell Tissue Total RNA...-V21.1.pdf

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    2021-06-10 17:45:20
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FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2

快速、安全无毒的细胞、组织RNA柱式提取试剂盒
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920.0
市场价
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920.0
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货号：
RC112-01
所属分类
柱式提取
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说明书
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FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2

快速、安全无毒的细胞、组织RNA柱式提取试剂盒

动物组织/细胞总RNA提取；产物可用于RT-PCR；Real-Time PCR；芯片分析

·  安全无毒：无需β-巯基乙醇和酚/氯仿

·  快速：常温操作6min即可

·  基因组残留少：无需DNase I膜上消化，一步去除gDNA污染

·  RNA纯度高：获得的RNA可直接用于下游纯度要求高的实验

·  通用性强：兼容各种细胞、组织样本

1.快速

6min即可完成动物组织、细胞RNA提取（图中标注时间为裂解及离心时间）。

 

2.RNA产量高、纯度高

 

分别使用Vazyme #RC112 (上图简称：V)与市售相关产品，按照各自说明书提取大鼠肝脏组织(10 mg) 、293细胞样本的总RNA。分别对RNA产物进行浓度和纯度检测，从图中可以看出Vazyme #RC112提取不同样本的总RNA与市售其他产品相比，产量更高。OD260/280及OD260/230数值更接近标准数值，纯度更好。

 

3.通用性强

使用Vazyme #RC112 对以下9 种样本（人293 细胞、Hela细胞，大鼠：肝、脾、肺、肾、心、脑组织，小鼠：脂肪组织）进行RNA 提取纯化，并对最终获得的RNA 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出Vazyme #RC112 能很好地兼容不同的细胞和动物组织样本RNA 的提取。

本试剂盒可从动物组织、细胞中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚/氯仿抽提，也无需β-巯基乙醇即可提取出高质量的RNA，全程仅需6 min。试剂盒中FastPure gDNA-Filter Columns Ⅲ能有效地去除杂质和gDNA，FastPure RNA Columns Ⅲ能高效地结合RNA，搭配优化后的Buffer，得到的总RNA纯度高，gDNA残留少，无蛋白和其他杂质污染，可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析等多种下游实验。

组分

RC112-01（50 rxn）

Buffer RL

35 ml

Buffer RW1

45 ml

Buffer RW2

20 ml

RNase-free ddH2O

10 ml

FastPure gDNA-Filter Columns Ⅲ (each in a 2 ml Collection Tube)

50个

FastPure RNA Columns Ⅲ (each in a 2 ml Collection Tube)

50个

RNase-free Collection Tubes 1.5 ml

50个

 15 ~ 25℃储存，室温运输 。

关键词:
RC112
动物组织总RNA提取
细胞总RNA提取
柱式RNA提取
动物RNA提取
动物组织总RNA快速提取
提取
细胞总RNA快速提取
柱式RNA提取
核酸提取
RNA提取
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Q1：提取RNA出现降解

A1：（1）组织样本采集与保存不当：

          1. RNA 提取时要选新鲜组织或细胞样本，避免反复冻融。样品离开活体或原来的生长环境后，样品中的内源性RNase 开始降解RNA，降解速度与内源RNase 的含量及温度有关；

          2. 组织离体后须迅速放入液氮中速冻，后期再转移至-80℃长期保存；

          3. 或者可将新鲜动物组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中，在室温可存放一周，2 ~ 8℃ 存放一个月，或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃ 长期保存；

（2）提取操作：

1. 样本破碎过程中出现问题：

      a. 若细胞或组织样品未冻存（如新鲜样本/浸润Vazyme #R501中样本）需立即加入裂解液中，并迅速进行匀浆裂解，注意匀浆过程中温度不能过高；

      b. 若为冻存组织，需进行液氮研磨，在整个研磨过程中，样品不得融化；

2. 样本投入量：

样本投入量过多，裂解液中的裂解剂以及RNase抑制剂不能完全作用于所有的样本；且裂解不充分，导致RNase发挥作用造成内源性RNase的降解；

3. 无RNase操作：

确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase 污染，所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNase 污染，耐高温器物可于150℃ 烘烤4 - 6 h以去除RNase，其它器物可用0.1% 的DEPC 水浸泡过夜以去除RNase；做好防护工作，戴口罩和一次性干净手套，并在单独的洁净区操作；

（3）RNA 保存、电泳：

1. 保存：对提取的RNA 进行纯度和完整度检测，分管在-80℃长期保存或在-20℃ 短期保存，尽快使用，避免反复冻融；

2. 电泳：电泳前将电泳槽用3%双氧水浸泡20min，然后用RNase-free ddH2O进行冲洗，电泳缓冲液用RNase-free ddH2O进行配置，进行电泳检测可以提高电压并缩短跑胶时间，同时对电泳缓冲液进行冰浴降温，防止跑胶过程中RNA发生降解。

 

Q2：提取不到RNA 或者RNA 产量低

A2：（1）样本采集与保存：

                1. 事先了解好提取样本中RNA含量水平，确保投入量达到要求起始值；

                2. 样本保存不当或者保存时间过长都有可能导致RNA 的降解，采集新鲜样本或经过液氮速冻后保存于-70℃ 或液氮中的样本；

       （2）样本前处理及裂解：匀浆或者液氮研磨不充分，裂解不充分，导致RNA 的释放不充分；

       （3）提取纯化：

               1. 柱式法：RNase-free ddH2O 滴加到纯化柱膜中央，尽可能覆盖整个吸附膜；纯化柱的洗脱体积为50-200 μl，若洗脱效果不理想，可以加入在55-70℃ 预热的RNase-free ddH2O 后，延长室温放置时间，离心后进行第二次洗脱；

 

Q3：提取的RNA 有基因组DNA 污染

A3：①减少样本起始投入量；

①使用DNase I 进行膜上消化清除DNA 污染；

③逆转录时选择含有基因组去除模块的逆转录试剂，推荐使用R323/R223；

④设计引物时选用跨内含子的引物，从而避免基因组DNA 模板参与扩增反应；

 

Q4：提取的RNA纯度低

A4：（1）蛋白质污染：

采用分光光度计检测提取产物OD260/OD280 偏低时，提示可能存在蛋白质污染：需要考虑是否组织投入量过大，导致裂解不充分，可以适当增加裂解液或者降低组织投入量进行提取；对于一些比较复杂、含有较多杂质的样本需进行特殊处理；

（2）盐离子及多糖污染：

采用分光光度计检测提取产物OD260/OD230偏低时，提示可能存在多糖及盐离子残留，需要考虑是否是因为乙醇未去除干净或者是组织投入量过大导致：

  1. 在提取中75%乙醇洗涤后室温放置5 min 再进行离心操作，以最大程度上去除盐离子污染；
  2. 洗脱后RNA中有盐离子残留：

纯化柱需要进行两次漂洗液2 洗涤，如果两次洗涤后还存在盐离子残留，则在加入漂洗液2后，室温放置5 min 再进行离心操作，以最大程度上去除盐离子污染；

  1. 洗脱后RNA有乙醇残留：

确认漂洗液2 洗涤后，按操作说明所需的离心转速进行空管离心操作；如果仍乙醇残留，可在空管离心后在室温放置 5 min，最大程度上去除残留乙醇；

（3）脂肪污染：

处理脂肪含量丰富的组织时，加入裂解液离心之后，上层是大量脂肪，可以转移澄清中间层进行下一步操作。

 

Q5：纯化柱出现堵塞问题

A5：（1）样品用量太多：

RC112适用于提取10 - 20 mg动物组织或者＜5×106个培养细胞，超量的组织会降低产量以及纯度，操作时应减少样本使用量；

（2）样品富含肌纤维：

肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维，肌纤维的分子量大，会引起柱子堵塞，样本处理时采用液氮研磨方式会降低堵柱现象；

（3）组织研磨或者匀浆不充分：

研磨或者匀浆不充分时，碎片有可能导致柱堵塞，将裂解后的液体先进行13,000×g 离心5 min，取上清再加入gDNA-Filter Columns；

（4）样本裂解不充分：

减少投入量；增加裂解液的体积；充分震荡，直至样本无明显团块；

（5）消化液中存在不溶解的物质：

若样品消化后仍存在明显的颗粒，于12,000 g 离心3 min 去除未消化的物质。

 

Q6：RC112和RC101提细胞样本（如293细胞、Hela细胞）或者组织样本效果有什么差别吗

A6：研发端测试RC112和RC101提细胞样本（如293细胞、Hela细胞）的rna效果基本一致。RC112更快速，RC101兼容范围广。

 

Q7：RC112试剂盒中的RNA吸附柱最大结合能力是多少

A7：RNA吸附柱最大结合能力200μg。

 

Q8：RC112与RC101区别是什么

A8：RC101配有DNase膜上消化模块，无需单独购买；RC112无需DNase膜上消化，一步去除gDNA；

RC101产量高；RC112速度快，常温只需6min；

RC112安全无毒，无需β巯基乙醇。

 

 

 

Dai C, Zhang Q, Shen L, et al. Quercetin Attenuates Quinocetone-Induced Cell Apoptosis In Vitro by Activating the P38/Nrf2/HO-1 Pathway and Inhibiting the ROS/Mitochondrial Apoptotic Pathway. Antioxidants (Basel). 2022, 11(8): 1498. PMID:36009217 (IF:7.675)

Zhen Y, Ge L, Xu Q, et al. Normal Light-Dark and Short-Light Cycles Regulate Intestinal Inflammation, Circulating Short-chain Fatty Acids and Gut Microbiota in Period2 Gene Knockout Mice. Front Immunol. 2022, 13: 848248. PMID:35371053 (IF:7.561)

Zhen Y, Xi Z, Hu L, et al. Impacts of Circadian Gene Period2 Knockout on Intestinal Metabolism and Hepatic Antioxidant and Inflammation State in Mice. Oxid Med Cell Longev. 2022, 2022: 7896371. PMID:35910841 (IF:7.31)

Chen Y, Ling Z, Cai X, et al. Activation of YAP1 by N6-Methyladenosine-Modified circCPSF6 Drives Malignancy in Hepatocellular Carcinoma. Cancer Res. 2022, 82(4): 599-614. PMID:34916222 (IF:12.701)

Li T, Ren Y, Zhang T, et al. Duck LGP2 Downregulates RIG-I Signaling Pathway-Mediated Innate Immunity Against Tembusu Virus. Front Immunol. 2022, 13: 916350. PMID:35784309 (IF:7.561)

Zhang J, Fan X, Zhou Y, et al. The PRMT5-LSD1 axis confers Slug dual transcriptional activities and promotes breast cancer progression. J Exp Clin Cancer Res. 2022, 41(1): 191. PMID:35655230 (IF:11.161)

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FastPure Host Removal and Microbiome DNA Isolation Kit
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1350.00
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