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FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2

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产品分类
  • cp

    FastPure Cell Tissue Total RNA...-V21.1.pdf

    大小:
    2021-06-10 17:45:20
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1000

FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2

价格:
¥
920.0
市场价
920.0
浏览量:
1000
货号:
RC112-01
所属分类
柱式提取
数量:
-
+
库存:
993
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
产品详情
FAQ
组分
说明书

FastPure® Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2

超快速、安全无毒的细胞、组织RNA柱式提取试剂盒

安全无毒:无需β-巯基乙醇和酚/氯仿

快速:常温操作6min即可

基因组残留少:无需DNase I膜上消化,一步去除gDNA污染

RNA纯度高:获得的RNA可直接用于下游纯度要求高的实验

通用性强:兼容各种细胞、组织样本

1.快速

最短6min即可完成动物组织、细胞RNA提取(图中标注时间为裂解及离心时间)。

2.RNA产量高、纯度高

 

分别使用Vazyme #RC112 (上图简称:V)与市售相关产品( 分别来自 Q、T、C、Ta、E、O、A、M 公司),按照各自说明书提取大鼠肝脏组织(10 mg) 、293细胞样本的总RNA。分别对RNA产物进行浓度和纯度检测,从图中可以看出Vazyme #RC112提取不同样本的总RNA与市售其他产品相比,产量更高。OD260/280及OD260/230数值更接近标准数值,纯度更好。

3.通用性强

使用Vazyme #RC112 对以下9 种样本(人293 细胞、Hela细胞,大鼠:肝、脾、肺、肾、心、脑组织,小鼠:脂肪组织)进行RNA 提取纯化,并对最终获得的RNA 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,可以看出Vazyme #RC112 能很好地兼容不同的细胞和动物组织样本RNA 的提取。

本试剂盒可从动物组织、细胞中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚/氯仿抽提,也无需β-巯基乙醇即可提取出高质量的RNA,全程仅需6 min。试剂盒中FastPure® gDNA-Filter Columns Ⅲ能有效地去除杂质和gDNA,FastPure® RNA Columns Ⅲ能高效地结合RNA,搭配优化后的Buffer,得到的总RNA纯度高,gDNA残留少,无蛋白和其他杂质污染,可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析等多种下游实验。

组分

RC112-01(50 rxn)

Buffer RL

35 ml

Buffer RW1

45 ml

Buffer RW2

20 ml

RNase-free ddH2O

10 ml

FastPure® gDNA-Filter Columns Ⅲ (each in a 2 ml Collection Tube)

50个

FastPure® RNA Columns Ⅲ (each in a 2 ml Collection Tube)

50个

RNase-free Collection Tubes 1.5 ml

50个

 15 ~ 25℃储,室温运输 。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:提取RNA出现降解

A1:(1)组织样本采集与保存不当:

          1. RNA 提取时要选新鲜组织或细胞样本,避免反复冻融。样品离开活体或原来的生长环境后,样品中的内源性RNase 开始降解RNA,降解速度与内源RNase 的含量及温度有关;

          2. 组织离体后须迅速放入液氮中速冻,后期再转移至-80℃长期保存;

          3. 或者可将新鲜动物组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中,在室温可存放一周,2 ~ 8℃ 存放一个月,或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃ 长期保存;

(2)提取操作:

1. 样本破碎过程中出现问题:

      a. 若细胞或组织样品未冻存(如新鲜样本/浸润Vazyme #R501中样本)需立即加入裂解液中,并迅速进行匀浆裂解,注意匀浆过程中温度不能过高;

      b. 若为冻存组织,需进行液氮研磨,在整个研磨过程中,样品不得融化;

2. 样本投入量:

样本投入量过多,裂解液中的裂解剂以及RNase抑制剂不能完全作用于所有的样本;且裂解不充分,导致RNase发挥作用造成内源性RNase的降解;

3. 无RNase操作:

确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase 污染,所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNase 污染,耐高温器物可于150℃ 烘烤4 - 6 h以去除RNase,其它器物可用0.1% 的DEPC 水浸泡过夜以去除RNase;做好防护工作,戴口罩和一次性干净手套,并在单独的洁净区操作;

(3)RNA 保存、电泳:

1. 保存:对提取的RNA 进行纯度和完整度检测,分管在-80℃长期保存或在-20℃ 短期保存,尽快使用,避免反复冻融;

2. 电泳:电泳前将电泳槽用3%双氧水浸泡20min,然后用RNase-free ddH2O进行冲洗,电泳缓冲液用RNase-free ddH2O进行配置,进行电泳检测可以提高电压并缩短跑胶时间,同时对电泳缓冲液进行冰浴降温,防止跑胶过程中RNA发生降解。

 

Q2:提取不到RNA 或者RNA 产量低

A2:(1)样本采集与保存:

                1. 事先了解好提取样本中RNA含量水平,确保投入量达到要求起始值;

                2. 样本保存不当或者保存时间过长都有可能导致RNA 的降解,采集新鲜样本或经过液氮速冻后保存于-70℃ 或液氮中的样本;

       (2)样本前处理及裂解:匀浆或者液氮研磨不充分,裂解不充分,导致RNA 的释放不充分;

       (3)提取纯化:

               1. 柱式法:RNase-free ddH2O 滴加到纯化柱膜中央,尽可能覆盖整个吸附膜;纯化柱的洗脱体积为50-200 μl,若洗脱效果不理想,可以加入在55-70℃ 预热的RNase-free ddH2O 后,延长室温放置时间,离心后进行第二次洗脱;

 

Q3:提取的RNA 有基因组DNA 污染

A3:①减少样本起始投入量;

①使用DNase I 进行膜上消化清除DNA 污染;

③逆转录时选择含有基因组去除模块的逆转录试剂,推荐使用R323/R223;

④设计引物时选用跨内含子的引物,从而避免基因组DNA 模板参与扩增反应;

 

Q4:提取的RNA纯度低

A4:(1)蛋白质污染:

采用分光光度计检测提取产物OD260/OD280 偏低时,提示可能存在蛋白质污染:需要考虑是否组织投入量过大,导致裂解不充分,可以适当增加裂解液或者降低组织投入量进行提取;对于一些比较复杂、含有较多杂质的样本需进行特殊处理;

(2)盐离子及多糖污染:

采用分光光度计检测提取产物OD260/OD230偏低时,提示可能存在多糖及盐离子残留,需要考虑是否是因为乙醇未去除干净或者是组织投入量过大导致:

  1. 在提取中75%乙醇洗涤后室温放置5 min 再进行离心操作,以最大程度上去除盐离子污染;
  2. 洗脱后RNA中有盐离子残留:

纯化柱需要进行两次漂洗液2 洗涤,如果两次洗涤后还存在盐离子残留,则在加入漂洗液2后,室温放置5 min 再进行离心操作,以最大程度上去除盐离子污染;

  1. 洗脱后RNA有乙醇残留:

确认漂洗液2 洗涤后,按操作说明所需的离心转速进行空管离心操作;如果仍乙醇残留,可在空管离心后在室温放置 5 min,最大程度上去除残留乙醇;

(3)脂肪污染:

处理脂肪含量丰富的组织时,加入裂解液离心之后,上层是大量脂肪,可以转移澄清中间层进行下一步操作。

 

Q5:纯化柱出现堵塞问题

A5:(1)样品用量太多:

RC112适用于提取10 - 20 mg动物组织或者<5×106个培养细胞,超量的组织会降低产量以及纯度,操作时应减少样本使用量;

(2)样品富含肌纤维:

肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维,肌纤维的分子量大,会引起柱子堵塞,样本处理时采用液氮研磨方式会降低堵柱现象;

(3)组织研磨或者匀浆不充分:

研磨或者匀浆不充分时,碎片有可能导致柱堵塞,将裂解后的液体先进行13,000×g 离心5 min,取上清再加入gDNA-Filter Columns;

(4)样本裂解不充分:

减少投入量;增加裂解液的体积;充分震荡,直至样本无明显团块;

(5)消化液中存在不溶解的物质:

若样品消化后仍存在明显的颗粒,于12,000 g 离心3 min 去除未消化的物质。

 

Q6:RC112和RC101提细胞样本(如293细胞、Hela细胞)或者组织样本效果有什么差别吗

A6:研发端测试RC112和RC101提细胞样本(如293细胞、Hela细胞)的rna效果基本一致。RC112更快速,RC101兼容范围广。

 

Q7:RC112试剂盒中的RNA吸附柱最大结合能力是多少

A7:RNA吸附柱最大结合能力200μg。

 

Q8:RC112与RC101区别是什么

A8:RC101配有DNase膜上消化模块,无需单独购买;RC112无需DNase膜上消化,一步去除gDNA;

RC101产量高;RC112速度快,常温只需6min;

RC112安全无毒,无需β巯基乙醇。

 

 

 

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