搜索
搜索

科技成就健康生活

 

产品

科研试剂

高通量试剂

药物研发试剂

分子诊断试剂

动物疫病诊断

产品分类
  • cp

    RA101说明书-V21.2.pdf

    大小:
    2022-08-04 08:51:20
  • cp

    RACE序列比对软件使用说明书.pdf

    大小:
    2022-08-05 10:17:28
  • cp

    RACE引物设计软件使用说明书.pdf

    大小:
    2022-08-05 10:14:46
1/1
浏览量:
1000

HiScript-TS 5'/3' RACE Kit

HiScript-TS 5'/3' RACE Kit 优异的逆转录性能 高效的 cDNA 扩增性能 实验便捷:配套的RACE 引物设计软件和测序比对软件 HiScript-TS 5’/3’ RACE Kit 以 RNA 为模板高效逆转全长 cDNA,并以 cDNA 为模板快速扩增其 5’末端或 3’末端。试剂盒提供定向改造的具有 Template-Switching 活性的逆转录酶和高保真 PCR 扩增 Mix,无需进行接头连接。其中逆转录模块可逆转长度高达 15 kb 的转录本,识别丰度低至 0.9 RPKM(Reads Per Kilobase Per Million Reads) 的转录本;PCR 模块可兼容 GC 含量范围为 36-70% 的转录本。优异的逆转录性能与 cDNA 扩增性能提高了 RACE 成功率。产品 Mix 形式简化了加样流程,使操作更为简便快捷。同时配套RACE 引物设计软件和测序比对软件,使 RACE 实验变得不再复杂。 Box 1, -80 ~ -65°C保存,干冰运输; Box 2, -30 ~ -15°C保存,干冰运输。        
价格:
¥
5000.0
市场价
5000.0
浏览量:
1000
货号:
RA101-01
数量:
-
+
库存:
999
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
产品详情
FAQ
组分
说明书

HiScript-TS 5'/3' RACE Kit

优异的逆转录性能

高效的 cDNA 扩增性能

实验便捷:配套的RACE 引物设计软件和测序比对软件

HiScript-TS 5’/3’ RACE Kit 以 RNA 为模板高效逆转全长 cDNA,并以 cDNA 为模板快速扩增其 5’末端或 3’末端。试剂盒提供定向改造的具有 Template-Switching 活性的逆转录酶和高保真 PCR 扩增 Mix,无需进行接头连接。其中逆转录模块可逆转长度高达 15 kb 的转录本,识别丰度低至 0.9 RPKM(Reads Per Kilobase Per Million Reads) 的转录本;PCR 模块可兼容 GC 含量范围为 36-70% 的转录本。优异的逆转录性能与 cDNA 扩增性能提高了 RACE 成功率。产品 Mix 形式简化了加样流程,使操作更为简便快捷。同时配套RACE 引物设计软件和测序比对软件,使 RACE 实验变得不再复杂。

Box 1, -80 ~ -65°C保存,干冰运输;

Box 2, -30 ~ -15°C保存,干冰运输。

 

 

 

 
关键词:
race
扩增
软件
cdna
性能
逆转录
转录
hiscript-ts
保存
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:试剂盒中3’和5’ Control GSP扩增出来的长度是多长?

A1:3’ 长1380bp,5’ 579bp。

 

Q2:无扩增产物或者产物弥散

A2:(1)RNA提取物中无目的转录本:可以设计已知转录本区域的qPCR或PCR引物进行目的产物检测;

        (2)RNA降解:进行试验前检测RNA的完整度,可以通过RNA琼脂糖凝胶电泳观察RNA的完整度,也可以使用Agilent RNA 6000 Pico Kit 评价RNA完整度;

        (3)目的转录本表达丰度低:通过qPCR或者PCR结果判定基因表达丰度。若检测后发现表达丰度低,可以增加RNA模板投入量(不超过4 μg);增加cDNA的投入量,减少cDNA稀释倍数(50 μl PCR反应体系,未稀释cDNA投入量不超过10 μl);

        (4)设计Nested GSP,进行多轮巢式PCR,富集产物片段同时保证了扩增产物特异性;

        (5)待扩增目的片段过长:GSP设计尽可能放在已知序列末端。若扩增片段≤3Kb,延伸时间为3min,若扩增片段>3Kb,产物每增加1kb,延伸时间提高30sec;

        (6)设计GSP引物Tm过低:设计GSP Tm≥65℃,若Tm≥70℃,使用降落PCR有利于提高产物特异性。

 

Q3:PCR产生复杂带型

A3:(1)目的基因属于多基因家族,可以进行数据库对比,针对特异性区段序列设计GSP;

        (2)可能是RNA前体具有可变剪接形式,可以进行数据库对比,针对特异性区段序列设计GSP;

        (3)扩增非特异性:设计额外的NGSP,进行多轮巢式PCR(不超过三次),将目的产物进行切胶回收,再次进行PCR扩增。

建议:跑胶出来的条带,可全部回收,克隆测序。

 

Q4:PCR产生的条带较弱

A4:(1)模板量过少,建议投入cDNA原液;

     (2)引物扩增效率差,建议重新设计引物或者进行多轮巢式PCR(不超过三轮)(3)目的转录本表达丰度低:通过qPCR或者PCR结果判定基因表达丰度。若检测后发现表达丰度低,可以增加RNA模板投入量(不超过4μg);增加cDNA的投入量,减少cDNA稀释倍数(50μl PCR反应体系,未稀释cDNA投入量不超过10μl);

 

Q5:无 poly A+ RNA的如何进行3‘RACE或5’RACE?

A5:5‘端RACE可使用5’Random Primer进行一链cDNA合成(试剂盒中提供);或使用GSP进行一链cDNA合成,建议下一步PCR扩增时,使用巢式GSP进行扩增,特异性和阳性率会提高。

3‘端,可通过Poly Polymerase进行加A处理后进行试验,或通过其他3’末端转移酶进行寡聚加A尾处理后进行实验。

 

Q6:逆转录时,针对没有帽子结构的RNA,cDNA是否能加上接头?

A6:可以的。无5’帽子结构,逆转录酶可以在模板末端加上特定碱基与接头配对。如果有5’帽子结构的加接头效率更高。同理降解RNA末端也可以加上。

但当遇到RNA复杂结构而导致逆转录酶掉下模板的情况下,cDNA末端无法添加特定碱基。

 

Q7:基因组残留会影响实验结果吗?

A7:如果基因组残留<20%RNA投入量,影响不明显,如果大于20%,会对cDNA扩增产生抑制,建议重新制备RNA。

这是描述信息
上一页
1

售后服务   服务流程   |   订购流程   |  真伪查询

邮  箱  sales@vazyme.com (销售咨询)
support@vazyme.com (技术支持)
marketing@vazyme.com (市场推广)

举报电话  025-83700665

举报邮箱   jubao@vazyme.com

微信公众号

扫码关注

 地 址:江苏省南京经济技术开发区科创路红枫科技园C2栋   电话:400-600-9335  网站建设: 中企动力 南京

搜索
搜索