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    One Step Mouse Genotyping Kit-V21.1.pdf

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    2021-05-21 13:37:14
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One Step Mouse Genotyping Kit

动物组织直接进行 PCR 反应的试剂盒
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货号：
PD101-01
所属分类
直接扩增PCR
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One Step Mouse Genotyping Kit

动物组织直接进行 PCR 反应的试剂盒

小鼠基因型鉴定

·  基于蛋白酶 K 的特制裂解液。

·  裂解产物直接用于PCR扩增，无需提取基因组。

·  广泛适用于2 kb以内目标片段扩增，并适用于4对引物以内的多重PCR 反应。

使用 One Step Mouse Genotyping Kit 以同一个粗提样品为模板，扩增17个不同的基因 (长度为 200 bp-800bp 之间)。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。

M: DL2,000 Plus DNA Marker

本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系，适用于小鼠基因型快速鉴定 (Rapid Genotyping)。可用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA，产物可直接进行PCR扩增，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，缩短了实验耗时。试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus)，包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开管/移液等操作，显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得TaqPlus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。

1 × Mouse tissue Lysis Buffer 4℃保存；其余组分-20℃保存。

关键词:
PD101
小鼠基因分型直扩PCR 预混液
小鼠基因分型直扩PCR mix
小鼠基因分型试剂
小鼠直扩试剂
小鼠组织直接PCR
小鼠基因型鉴定试剂
小鼠转基因检测
高GC体系扩增
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Q1：PD101试剂盒中Proteinase K的储存以及裂解的注意事项

A1：Proteinase K存储条件为 -20℃。若经常使用，可将Proteinase K分管保存在-20度，防止反复冻融。裂解时可以将Proteinase K与Lysis Buffer混匀后放在常温下即可，再取小鼠组织，其他可参照说明书。

 

Q2：PD101试剂盒中的2 × Taq Plus Master Mix 中是否有Mg2+，另外的MgCl2如何用

A2：2 × Taq Plus Master Mix 中有Mg2+，浓度为1.5 mM。关于MgCl2的使用，可在扩增效率不佳的时候，用来调节反应条件，每次可增加0.5mM。

 

Q3：PD101试剂盒能否做其他物种

A3：确定可以做大鼠和小鼠。其他昆虫，哺乳动物也可以，但不能保证结果。建议尝试用P505，这款酶的直扩能力很强。

 

Q4：使用PD101，裂解孵育之后小鼠尾巴形态没变，是否裂解成功

A4：这是正常的现象。加入裂解液孵育之后已经有部分基因组DNA释放出来了，小鼠尾巴的形态改变不大。

 

Q5：PD101裂解组织后的裂解液可以用NanoDrop测DNA浓度吗

A5：不可以，因为裂解组织后的裂解液中的东西比较复杂，有buffer、蛋白酶K，而且DNA的浓度低，用NanoDrop测量容易虚高。

 

Q6：使用PD101，在一个反应体系中加入两对引物，扩增效果差

A6：可能两对引物会互相干扰，建议单独扩增。若一定要在同一个体系中进行，建议调整两对引物使用的比例，如果重新设计引物，在保证引物特异性的前提下，使四条引物的Tm值尽量接近，差值不要太大（2-3℃）；如果不重新设计引物，也可以适当调整退火温度，同时，适当延长退火时间（30s-1 min）。

 

Q7：扩增产量低或者无法扩增

A7：(1) 组织中的一些PCR抑制物混入裂解液中：可尝试将裂解产物稀释10倍后再进行PCR扩增；

(2) DNA释放效率较差：可尝试延长55℃孵育时间至3 h；

(3) Proteinase K没有充分灭活：灭活步骤在沸水浴中进行；

(4) PCR循环数不够：一般而言，30～35个循环已经足以扩增足量的产物。然而对于某些片段，提高循环数可以获得更好的扩增效果；

(5) 扩增反应退火温度设置太高：降低退火温度（每次降低3℃）；

(6) PCR引物错误：设置以纯化过的小鼠基因组为模板的阳性对照反应。

 

Q8：非特异性产物很多

A8：(1) PCR反应体系在室温下配制：在冰水浴中配制反应体系可显著降低非特异性扩增；

(2) 扩增反应退火温度设置太低：提高退火温度（每次提高2℃）；

(3) PCR引物错配严重：重新设计引物。

 

Q9：阴性对照出现扩增

A9：PCR反应体系出现污染：逐个更换组织裂解体系、PCR扩增体系中的每一个组分。

 

Q10：使用PD101小鼠趾甲裂解效果不好，孵育了近1h，可以提供什么建议

A10：（1）建议把组织块剪大一些，即与指甲接触的肌肉部分，并稍微延长孵育时间；

（2）建议从PCR体系、反应程序（设置阳性对照）上优化。

 

Q11：可以选择哪种酶来替换PD101试剂盒中的酶

A11：可以用高产量的Taq酶（P212/P213）替换。

 

Zhang Z, Li Y, Lv X, et al. VLM catecholaminergic neurons control tumor growth by regulating CD8+ T cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2021, 118(28): e2103505118. PMID:34260392 (IF:11.205)

Fei X, Dou Y, Wang L, et al. Homer1 promotes the conversion of A1 astrocytes to A2 astrocytes and improves the recovery of transgenic mice after intracerebral hemorrhage. J Neuroinflammation. 2022, 19(1): 67. PMID:35287697 (IF:8.322)

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Blood Direct PCR Kit V2
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DL2000 Plus DNA Marker
60.00
DL2000 Plus DNA Marker
60.00
RNase-free ddH₂O
50.00
RNase-free ddH₂O
50.00
Ultra GelRed (10,000 ×)
700.00
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1 × TAE 速溶颗粒
350.00
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