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    Multiplex PCR Kit-V21.1.pdf

    大小:
    2021-10-25 17:07:53
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Multiplex PCR Kit

MultiplexPCRKit特异性扩增可达19重多重性:检测重数可达19重甚至更高。均一性:扩增稳定均一,靶点偏好性极低。适应性:广泛兼容各种GC含量和长度的扩增子,随酶附赠GCEnhancer。特异性:扩增缓冲高度优化,最大程度上抑制非特异性扩增。 灵敏性:使用基因组DNA作为模板,扩增灵敏度可达1ng。MultiplexPCRKit具有值得信赖的扩增能力和灵敏度,能在默认条件下高效完成绝大多
价格:
¥
900.0
市场价
900.0
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货号:
PM101-01/02/03
所属分类
多重PCR
数量:
-
+
库存:
29996
暂时无货
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FAQ
组分
说明书

Multiplex PCR Kit

多重性:检测重数可达19重甚至更高

均一性:扩增稳定均一,靶点偏好性极低。

适应性:广泛兼容各种GC含量和长度的扩增子,随酶附赠GC Enhancer

特异性:扩增缓冲高度优化,最大程度上抑制非特异性扩增。

灵敏性:使用基因组DNA作为模板,扩增灵敏度可达1 ng

Multiplex PCR Kit具有值得信赖的扩增能力和灵敏度,能在默认条件下高效完成绝大多数多重扩增反应。如图所示,以人基因组为模板进行19重检测,扩增子长度范围为70 bp-916 bp。可见,在1 ng-500 ng的模板量范围内Multiplex PCR Kit都可以均一的对各位点进行多重扩增。

M: 100 bp DNA Ladder

 

Multiplex PCR Kit具有优秀的片段长度兼容性。如图所示,以小鼠基因组DNA为模板,扩增1.55 kb、1.07 kb、0.45 kb三个长度差异较大的目标位点。可见,试剂盒能在单个反应体系中兼顾各种长度的扩增子。

1:三重PCR;2-4:单重PCR;5-7:两重PCR。

M: DL5,000 DNA Marker

组分

PM101-01

PM101-02

PM101-03

Multiplex DNA Polymerase

50 μl

200 μl

 

PM101-02 × 5

2 × Multiplex Buffer

1.25 ml

4 × 1.25 ml

5 × Multiplex GC Enhancer

700 μl

4 × 700 μl

所有组分-20°C保存,有效期一年。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:PM101一次可以扩多少个片段?酶的种类?扩增片段是否含有A尾,是否有5’-3’外切酶活性

A1:一次可以扩19个片段;为Taq酶;扩增产物末端有A;具有5’-3’外切酶活性。

 

Q2:跑PAGE胶,有很多弥散条带,有时候还有微笑条带

A2:建议延长延伸时间,降低循环数。

 

Q3:多重PCR跑胶后发现条带数量比目的条带数量少

A3:(1)条带全部扩增出来,因为条带设计的大小相近,跑胶未能区分开:建议将胶浓度提升、配置大长胶、延长跑胶时间;

(2)有些条带未成功扩增:前提需要重新跑胶进行鉴定,确定不是条带没有跑开:

①需要推荐引物设计原则:引物长度21 - 30 bp,GC含量40% - 60%,退火温度68°C以上;

②推荐目标片段不超过1500 bp;

③预先单独检测每对引物的扩增情况,尽可能挑选扩增特异性好的引物对进行组合;

④推荐每条引物反应终浓度为0.1 - 0.2 μM;

⑤如某些目标片段产量偏低,可适度提高其对应引物使用量以提高扩增产量;

⑥不同引物之间出现相互干扰:引物设计时,要避免不同引物之间出现序列互补的现象,以免互相干扰扩增。

 

Q4:多重PCR扩增产物少或没有扩增

A4:(1)模板

①使用高质量的模板,确认DNA模板纯度、浓度;

②增加模板使用量,25 μl反应体系中推荐模板量:人的基因组50 ng,质粒500 pg,cDNA 1 - 2.5 μl;

③扩增子GC含量过高或含有复杂二级结构时,推荐尝试Multiplex GC Enhancer;

(2)引物

①检查单对引物的扩增性能和特异性;

②使用高质量的引物,检查引物是否降解,确认每个反应中引物终浓度为0.1 - 0.2 μM;

③产物过长,重新设计引物;

④提高低产或缺失扩增子引物使用量。

(3)程序

①确认PCR程序预变性条件,以充分释放Multiplex DNA Polymerase活性。一般而言,抗体法热启动的酶预变性为30 s,进行直扩时可适当延长至5 min;化学法热启动的酶预变性为5-15 min;

②增加PCR循环数;

③降低退火温度(间隔1 - 3℃),必要时进行退火温度梯度尝试。确认退火时间为90 sec,必要时可延长退火时间至3 min;

④延长循环内延伸时间、延长彻底延伸时间。

 

Q5:多重PCR出现杂带,每对引物单独做PCR没有杂带

A5:主要是引物多了,错配的概率变高了。可以通过检测杂带的序列,判断是什么引物错配引起的。对于多重PCR来说,延伸时间非常重要,延长延伸时间有利于均一性。

 

Q6:存在非特异性扩增

A6:(1) 减少循环数;

(2) 提高退火温度;

(3) 减少引物使用量;

(4) 重新设计引物;

(5) 扩增子高GC或含有复杂二级结构时,推荐尝试Multiplex GC Enhancer,添加终浓度为0.5 - 1.0 ×。

 

Q7:电泳时条带模糊

A7:(1) 减少循环数(每次减少3个循环);

(2) 减少起始模板量;

(3) 延长彻底延伸步骤时间至15 - 30 min;

(4) 降低电泳电压,更换新的电泳缓冲液。

 

这是描述信息
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