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    诺唯赞miRNA引物设计软件使用说明书.pdf

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    miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix-V21.1.pdf

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    2021-10-25 17:16:17
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miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix

miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix miRNA染料法定量专用预混液 较高的扩增特异性:基于化学法热启动的AceTaq® DNA Polymerase,95°C前完全封闭酶活,配以特异性促进因子Exactor,扩增更特异。 优异的反应体系:合适的Buffer 组分及浓度,更适用于microRNA的逆转录及qPCR 实验。 宽广的平台兼容:miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix中添加通用型ROX使得mix能够在兼容不同平台qPCR仪器,而无需进行ROX浓度调整。 图1. 较高的扩增特异性 microRNA 序列短,同一家族不同成员序列极其相似,有些仅有单个碱基差别,因此特异性对 microRNA 定量至关重要。miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 以化学法热启动 AceTaq® DNA Polymerase 为核心酶,配以优化的Buffer,能够较大限度区分 microRNA 同一家族不同成员间单个碱基的差异,实现高特异性定量。 图2. 优异的扩增灵敏度 以 HeLa细胞Total RNA为模板逆转录,扩增hsa-miR-15、hsa-miR-29、hsa-miR-155、hsa-miR-200基因; 以小鼠肝脏组织Total RNA 样本进行逆转录,扩增 mmu-miR-16、mmu-miR-20、mmu-miR-21 基因。结果显示,与同类产品相比,miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 配 套 miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101) 的反应体系,均有优异的表现。 图3. 宽广的平台兼容性 使用miRNA Universal SYBR  qPCR Master Mix(Vazyme #MQ101) 在不同qPCR 仪上扩增同一基因,在StepOnePlus、QuantStudio 3、CFX Connect 均具有优异的定量结果,说明Vazyme #MQ101 仪器适用性广,无需针对不同仪器调整 ROX 浓度。 本产品是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA定量反应的专用预混液。由于miRNA序列短,且同一家族的miRNA序列往往高度相近,故在定量时对特异性要求较高。本品基于化学法热启动的AceTaq® DNA Polymerase,配以优化的Buffer,能够较大地减少非特异性扩增;同时,特殊的ROX Reference Dye,使得预混液适应于所有qPCR仪器,无需在不同的仪器上调整ROX浓度,只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。 - 20℃避光保存
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miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix

miRNA染料法定量专用预混液

较高的扩增特异性:基于化学法热启动的AceTaq® DNA Polymerase,95°C前完全封闭酶活,配以特异性促进因子Exactor,扩增更特异。

优异的反应体系:合适的Buffer 组分及浓度,更适用于microRNA的逆转录及qPCR 实验。

宽广的平台兼容:miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix中添加通用型ROX使得mix能够在兼容不同平台qPCR仪器,而无需进行ROX浓度调整。

图1. 较高的扩增特异性

microRNA 序列短,同一家族不同成员序列极其相似,有些仅有单个碱基差别,因此特异性对 microRNA 定量至关重要。miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 以化学法热启动 AceTaq® DNA Polymerase 为核心酶,配以优化的Buffer,能够较大限度区分 microRNA 同一家族不同成员间单个碱基的差异,实现高特异性定量。

图2. 优异的扩增灵敏度

以 HeLa细胞Total RNA为模板逆转录,扩增hsa-miR-15、hsa-miR-29、hsa-miR-155、hsa-miR-200基因; 以小鼠肝脏组织Total RNA 样本进行逆转录,扩增 mmu-miR-16、mmu-miR-20、mmu-miR-21 基因。结果显示,与同类产品相比,miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 配 套 miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101) 的反应体系,均有优异的表现。

图3. 宽广的平台兼容性

使用miRNA Universal SYBR  qPCR Master Mix(Vazyme #MQ101) 在不同qPCR 仪上扩增同一基因,在StepOnePlus、QuantStudio 3、CFX Connect 均具有优异的定量结果,说明Vazyme #MQ101 仪器适用性广,无需针对不同仪器调整 ROX 浓度。

本产品是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA定量反应的专用预混液。由于miRNA序列短,且同一家族的miRNA序列往往高度相近,故在定量时对特异性要求较高。本品基于化学法热启动的AceTaq® DNA Polymerase,配以优化的Buffer,能够较大地减少非特异性扩增;同时,特殊的ROX Reference Dye,使得预混液适应于所有qPCR仪器,无需在不同的仪器上调整ROX浓度,只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。

- 20℃避光保存

关键词:
miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix
miRNA染料法定量专用预混液MQ101-01
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Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物,能否使用Vazyme #试剂盒(MR101+MQ101)?

A1:可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注:若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同,后续搭配MQ101无需合成反向引物,可以使用MQ101自带的mQ Primer R;若茎环引物序列不同,则不能使用MQ101提供的mQ Primer R,需合成正反向引物。

 

Q2、内参是否需要设计茎环引物及逆转录和定量的引物如何使用?

A2:若选择U6等较长的基因作为内参基因,由于序列相对较长,无需设计茎环逆转录引物,直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可,逆转录时投入内参下游引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参,需要设计茎环引物进行逆转录,推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。

 

Q3、如果要研究多个miRNA定量实验,是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录?

A3:是的,针对每个miRNA都要设计一条特异的茎环逆转录引物,一管反应中只能逆转一个miRNA(内参也是一样)。

 

Q4:在逆转录时,多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行?

A4:不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物同时进行多个miRNA逆转录时,不同特异性茎环引物茎环结构之间会相互干扰和影响。

 

Q5:逆转录体系应该投入多少RNA?

A5:如果提取的是Total RNA,MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量,但是不同miRNA表达丰度不同,建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA,逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量,具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。

 

Q6、miRNA为什么要合成茎环引物?

A6:因为miRNA较短,如果使用普通逆转录和定量方法,无法设计定量引物,需要在逆转录阶段将cDNA延长。

 

Q7:要分别做miRNA 和总RNA,可以先提出来总RNA,再分别逆转总RNA 和miRNA 吗

A7:可以,提出总的RNA 分两份,一份做普通逆转录,一份做miRNA 逆转录(颈环法或者加尾法)。

 

 

 

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