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DD4501-V22.1-PDF转曲.pdf
大小：2022-03-02 17:23:51
EGFP mRNA(N¹-Me-Pseudo UTP)
EGFP mRNA(N1-Me-Pseudo UTP)
EGFP mRNA(N1-Me-Pseudo UTP)经细胞转染后可表达增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP），该蛋白最初从水母（Aequorea victoria）中分离，最大发射波长为509 nm，激发的绿色荧光可以通过荧光显微镜或流式细胞术轻松检测。EGFP mRNA作为报告mRNA，是监测和优化转染效率的理想选择，可以作为mRNA转染的阳性对照。
本mRNA使用T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板，NTPs为底物，所有UTP均替换为N1-Me-Pseudo UTP，对启动子下游DNA序列进行转录，获得单链RNA(T7 High Yield RNA Transcription Kit(N1-Me-Pseudo UTP) Vazyme #DD4202）。通过Vaccinia Capping System(Vazyme #DD4109)和mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (Vazyme #DD4110)进行酶法加帽得到高加帽率的Cap 1结构。相比于Cap 0结构，具有Cap 1结构的mRNA对于哺乳动物系统更适合，且使用N1-Me-Pseudo UTP修饰，可提供更高的翻译效率并抑制mRNA介导的先天免疫激活。
利用TransIT-mRNA (MIRUS #MIR2250)转染试剂，将1 μg EGFP mRNA转染至HEK 293T细胞中，转染20 h后通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率，转染效率85%以上。
HEK293T细胞转染20 h后，EGFP mRNA(N1-Me-Pseudo UTP)表达荧光效果图及流式图
HEK293T细胞转染20h后，竞品EGFP mRNA表达荧光效果图及流式图
EGFP mRNA在25˚C储存4天，在4˚C和-20˚C储存14天，对纯度没有显著影响
EGFP mRNA反复冻融30次，对纯度没有显著影响
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产品 |
EGFP mRNA（N1-Me-Pseudo） DD4501 |
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mRNA长度 |
985个核苷酸 |
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浓度 |
1mg/mL |
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储存buffer |
RNase-free H2O |
-85 ~ -65℃保存，干冰运输
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