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2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

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    2022-03-10 17:40:21
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2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

价格：
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343.0
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货号：
PK511-01/02/03
所属分类
高保真PCR
数量：
-
+
库存:
26973
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暂时无货
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产品详情
FAQ
组分
说明书

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

一款使用方便、产量高的KeyPo高保真酶Mix

使用方便

高产量

高成功率

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)保持了超高的扩增成功率和灵敏度，同时可以实现5 sec/kb的快速扩增。产品对常规模板、粗品（酵母菌液、植物组织裂解产物、动物组织裂解产物、全血样本）和高GC体系（引物或模板）均具有广泛的适用性。通过添加了在常温下能够抑制其5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性的两种单克隆抗体，可以进行高特异性的热启动PCR反应。2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)只需加入模板和引物即可进行扩增，使用方便，且含电泳指示剂，PCR反应完成后无需额外添加loading buffer，可直接点样进行电泳。

组 分

PK511-01

PK511-02

PK511-03

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

1 ml

5 × 1 ml

15 × 1 ml

-30 ~ -15℃保存 

未找到相应参数组，请于后台属性模板中添加

Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer（货号P021），可以有效降低解链温度；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符，如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活，温度过低则模板变性不彻底；退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索最佳的退火温度；根据引物Tm值设置退火温度，如引物Tm值≥72℃，可删除退火步骤，直接进行后续的延伸步骤（两步法PCR）。

 

Q2：扩增的条带亮度不太亮。

A2：(1) 引物

检查人工合成的引物是否降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序；延长延伸时间，提高循环数。

 

Q3：扩增特异性差，非特异性扩增。

A3：(1) 引物

引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体，可降低引物浓度进行优化，必要时重新设计引物。

(2) 模板

模板不纯，被污染，需重新制备模板。

模板降解或过量，通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。

(3) 反应程序

反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，降低循环数调整；如果出现比目的条带大的杂带，可缩短延伸时间、降低循环数。

 

Q4：扩增产物跑胶条带弥散或拖尾。

A4：(1) 胶

制胶时要使胶完全融化。

(2) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(3) 模板

模板降解或过量，可通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长，模板是cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度，逆转录时不加随机引物重新逆转录。

(4) 反应程序

反应程序不够优化。退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索最佳的退火温度；尝试Touch Down 程序。

 

Q5：空白对照出现扩增产物。

A5：(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致，说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染，操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染，可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

 

Q6：高保真酶扩增保真性差，存在突变。

A6：高保真酶在PCR时扩增产物有突变，可以从以下几点来分析：

(1) 模板本身存在突变

检查模板，若模板是质粒，建议送质粒去测序；若模板是cDNA，建议重复实验，如果仍有突变，可能是cDNA有问题，建议重新制备cDNA，制备cDNA前检测RNA的完整度及纯度。

(2) 模板长时间在紫外光下照射，引入突变

切胶回收过程中避免长时间在紫外光下照射。

(3) 基因序列与NCBI上的不一致

建议再重复一次送去测序，若结果和上一次一样，说明序列可能和NCBI上的不一致。

(4) 少量序列存在非严谨序列

有相似重组序列，导致重组错位。

 

Q7：逆转录后的产物cDNA作为模板，使用高保真酶，一次应该加多少体积？

A7：说明书建议cDNA模板使用量为1-5μl（不超过PCR反应总体积的1/10），可在这个范围内尝试不同的使用量，摸索最佳使用量。

 

Q8：高保真酶扩增完的产物是否带A，若后面要做TA克隆该如何进行？

A8：高保真酶扩增完的产物不带A，后续做克隆可尝试使用Vazyme无缝克隆产品C601；若后面做TA克隆可用普通的Taq酶进行加A反应。

 

Q9：带颜色的PCR产物是否影响酶切效果？

A9：经测试，带颜色的PCR产物不会影响酶切效果。

组 分

PK511-01

PK511-02

PK511-03

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

1 ml

5 × 1 ml

15 × 1 ml
上一个
无
下一个
2 × Phanta Flash Master Mix(Dye Plus)
这是描述信息
FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit
220.00
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220.00
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600.00
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800.00
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966.00
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