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2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

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  • cp

    PK511说明书-V22.1.pdf

    大小:
    2022-03-10 17:40:21
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2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus) 一款使用方便、产量高的KeyPo高保真酶Mix 使用方便 高产量 高成功率 2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)保持了较高的扩增成功率和灵敏度,同时可以实现5 sec/kb的快速扩增。产品对常规模板、粗品(酵母菌液、植物组织裂解产物、动物组织裂解产物、全血样本)和高GC体系(引物或模板)均具有广泛的适用性。通过添加了在常温下能够抑制其5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性的两种单克隆抗体,可以进行高特异性的热启动PCR反应。2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)只需加入模板和引物即可进行扩增,使用方便,且含电泳指示剂,PCR反应完成后无需额外添加loading buffer,可直接点样进行电泳。 组 分 PK511-01 PK511-02 PK511-03 2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus) 1 ml 5 × 1 ml 15 × 1 ml -30 ~ -15℃保存 
价格:
¥
343.0
市场价
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货号:
PK511-01/02/03
所属分类
高保真PCR
数量:
-
+
库存:
26970
*具体价格咨询当地业务员
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组分
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2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

一款使用方便、产量高的KeyPo高保真酶Mix

快速扩增:5 sec/kb
保真度高:保真度是 Taq DNA Polymerase 的37倍
产量更高:带给您更亮的目的条带
操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,产物含蓝色Loading Buffer,可直接电泳检测

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)保持了较高的扩增成功率和灵敏度,同时可以实现5 sec/kb的快速扩增。产品对常规模板、粗品(酵母菌液、植物组织裂解产物、动物组织裂解产物、全血样本)和高GC体系(引物或模板)均具有广泛的适用性。通过添加了在常温下能够抑制其5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性的两种单克隆抗体,可以进行高特异性的热启动PCR反应。2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)只需加入模板和引物即可进行扩增,使用方便,且含电泳指示剂,PCR反应完成后无需额外添加loading buffer,可直接点样进行电泳。

 

PK511-01

PK511-02

PK511-03

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

1 ml

5 × 1 ml

15 × 1 ml

-30 ~ -15℃保存 

关键词:
dye
keypo
mix
plus
master
使用方便
ml
进行
扩增
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符,如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活,温度过低则模板变性不彻底;退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索适合的退火温度;根据引物Tm值设置退火温度,如引物Tm值≥72℃,可删除退火步骤,直接进行后续的延伸步骤(两步法PCR)。

 

Q2:扩增的条带亮度不太亮。

A2:(1) 引物

检查人工合成的引物是否降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量,长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;如果模板没有了,可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序;延长延伸时间,提高循环数。

 

Q3:扩增特异性差,非特异性扩增。

A3:(1) 引物

引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。

(2) 模板

模板不纯,被污染,需重新制备模板。

模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。

(3) 反应程序

反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数。

 

Q4:扩增产物跑胶条带弥散或拖尾。

A4:(1) 胶

制胶时要使胶完全融化。

(2) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(3) 模板

模板降解或过量,可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长,模板是cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度,逆转录时不加随机引物重新逆转录。

(4) 反应程序

反应程序不够优化。退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度;尝试Touch Down 程序。

 

Q5:空白对照出现扩增产物。

A5:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

 

Q6:高保真酶扩增保真性差,存在突变。

A6:高保真酶在PCR时扩增产物有突变,可以从以下几点来分析:

(1) 模板本身存在突变

检查模板,若模板是质粒,建议送质粒去测序;若模板是cDNA,建议重复实验,如果仍有突变,可能是cDNA有问题,建议重新制备cDNA,制备cDNA前检测RNA的完整度及纯度。

(2) 模板长时间在紫外光下照射,引入突变

切胶回收过程中避免长时间在紫外光下照射。

(3) 基因序列与NCBI上的不一致

建议再重复一次送去测序,若结果和上一次一样,说明序列可能和NCBI上的不一致。

(4) 少量序列存在非严谨序列

有相似重组序列,导致重组错位。

 

Q7:逆转录后的产物cDNA作为模板,使用高保真酶,一次应该加多少体积?

A7:说明书建议cDNA模板使用量为1-5μl(不超过PCR反应总体积的1/10),可在这个范围内尝试不同的使用量,摸索合适使用量。

 

Q8:高保真酶扩增完的产物是否带A,若后面要做TA克隆该如何进行?

A8:高保真酶扩增完的产物不带A,后续做克隆可尝试使用Vazyme无缝克隆产品C601;若后面做TA克隆可用普通的Taq酶进行加A反应。

 

Q9:带颜色的PCR产物是否影响酶切效果?

A9:经测试,带颜色的PCR产物不会影响酶切效果。

 

PK511-01

PK511-02

PK511-03

2 × KeyPo Master Mix (Dye Plus)

1 ml

5 × 1 ml

15 × 1 ml

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