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5 min TOPO-Blunt Cloning Kit

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  • C602-pCE3 Blunt-Zero Vector.dna

    大小：
    2022-07-01 14:00:32
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  • cp

    C602说明书-V22.2.pdf

    大小：
    2022-07-20 09:49:11
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5 min TOPO-Blunt Cloning Kit

5 min TOPO-Blunt Cloning Kit 高阳性率 反应快速 连接片段更长 5 min TOPO-Blunt Cloning Kit采用第三代Topoisomerase，配合合适的Buffer，活性更高，搭配自连抑制因子，提高克隆阳性率，5 min 完成高效连接。C602适用于平末端连接。 连接片段更长，高阳性率 将1kb、3kb、7kb回收后的片段使用C602 25℃连接5 min，进行转化涂板后，挑取单克隆进行菌落PCR验证。如图1，1kb、3kb、7kb片段的阳性率均为100%。 图1：1kb、3kb、7kb三个片段连接后的阳性率鉴定 -30~ -15℃ 保存
价格：
¥
750.0
市场价
元
0.0
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货号：
C602-01/02
所属分类
拓扑克隆
数量：
-
+
库存:
1998
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
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组分
说明书

5 min TOPO-Blunt Cloning Kit

高阳性率

反应快速

连接片段更长

5 min TOPO-Blunt Cloning Kit采用第三代Topoisomerase，配合合适的Buffer，活性更高，搭配自连抑制因子，提高克隆阳性率，5 min 完成高效连接。C602适用于平末端连接。

连接片段更长，高阳性率

将1kb、3kb、7kb回收后的片段使用C602 25℃连接5 min，进行转化涂板后，挑取单克隆进行菌落PCR验证。如图1，1kb、3kb、7kb片段的阳性率均为100%。

图1：1kb、3kb、7kb三个片段连接后的阳性率鉴定

-30~ -15℃ 保存

关键词:
阳性率
连接
片段
min
topo-blunt
primer
3kb
7kb
m13
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Q1：平板上长不出克隆/克隆很少/空载体

A1：插入片段必须为平末端PCR产物，5’端不能为磷酸化（不能是酶切产物）

A2：平板抗性为氨苄霉素

A3：如果插入片段回收浓度较低（＜20 ng/µl），需要重新制备插入片段，多管浓缩，以提升插入片段浓度；若插入片段回收浓度过高，需将其稀释以保证添加其体积数≥1 µl

A4：按照说明书推荐公式对插入片段投入量进行计算，避免小体积（＜1 µl）加入体系中，当计算投入量＜5 ng时，按5 ng投入

A5：反应最好在PCR仪中进行，合适连接温度是25℃

 

Q2：菌液PCR无目的条带

A1：只有空质粒的条带，说明重组不成功，按照Q1排查提高连接效率。

A2：PCR体系或程序不合适：没有目的条带也没有空质粒条带，建议优化PCR体系，程序；或者提取质粒，以质粒为模板进行PCR验证；或者进行酶切验证

A3：PCR试剂不合适：试剂不适合菌液直扩，或者扩增片段太长，超出了试剂的使用范围

 

Q3：多数克隆含有不正确的插入片段

A1：PCR产物混有非特异性产物：优化PCR体系，提高特异性；胶回收PCR产物；鉴定更多的克隆

A2：反应体系中混入了相同抗性的质粒：PCR扩增模板为环状质粒时，如扩增产物直接用于重组反应时需进行DpnⅠ消化，或者直接进行胶回收纯化

 

Q4：插入片段出现碱基突变

A1：只测试了一个样本，不一定可信，需要多测几个样本

A2：检查突变处的测序信号是否有问题，若为双峰或者杂峰不一定可信

A3：如果多个结果突变位点一致，可能是从模板上引入的或者模板序列与NCBI上的不一致

A4：制备插入片段时推荐使用高保真聚合酶

A5：若引物处发生碱基突变，可能是引物合成问题，建议重新合成引物进行实验

上一个
无
下一个
5 min TA/Blunt-Zero Cloning Kit
这是描述信息
Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase
618.00
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