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VAHTS Small RNA Library Prep Kit for Illumina V2

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NR811说明书-V23.1.pdf

大小：

2023-02-17 10:30:53

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VAHTS Small RNA Library Prep Kit for Illumina V2

升级版small RNA文库构建试剂盒，兼容更低的样本投入量，特殊样本建库效果更好

价格：

11500.0

市场价

元

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1000

货号：

NR811-01/02

所属分类

RNA建库试剂盒

数量：

库存:

1998

*具体价格咨询当地业务员

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产品详情

FAQ

组分

说明书

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VAHTS Small RNA Library Prep Kit for Illumina V2

升级版small RNA文库构建试剂盒，兼容更低的样本投入量，特殊样本建库效果更好

small RNA文库构建

· 样本兼容类型广：动植物总RNA、特殊样本（血清、血浆、外泌体）RNA、FFPE总RNA、分离纯化的small RNA

· 兼容低起始量样本：10 ng-1 μg动植物总RNA，≥1 ng血清、血浆、外泌体RNA

· 特殊样本建库成功率提高：血清、血浆、外泌体RNA建库成功率提高

· 有效文库转化率高：3’接头连接效率与逆转录效率提高，提升了有效文库产出

· 下机数据质量佳：表达重复相关性好，miRNA检出种类提高

VAHTS Small RNA Library Prep Kit for Illumina V2是针对Illumina高通量测序平台定向开发的small RNA文库构建专用试剂盒，本试剂盒在原有版本的基础上进行了体系优化，提升了试剂盒的稳定性及低投入量下文库产出。本试剂盒适用于模板起始量为10 ng-1 μg的动、植物总RNA，以及≥1 ng分离纯化的血清、血浆、外泌体RNA。small RNA的3’和5’端分别连上通用接头，再经过逆转录、 PCR扩增以及PAGE胶或磁珠纯化等步骤，最终得到适用于Illumina平台的测序文库。试剂盒包含文库构建所需的所有酶和缓冲液，所有组分都经过了严格的质量控制和功能验证，较大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

1. 广泛的物种兼容性与投入量兼容性

以1 μg、100 ng、10 ng动物样本（小鼠肝脏）、细胞样本（Hela细胞）、植物样本（大豆、玉米、水稻）总RNA为起始模板，参照NR811建库流程进行文库构建，使用 Qubit 检测文库浓度。

图1 不同物种和投入量下NR811文库产出浓度

结果显示，在不同物种和投入量下，NR811均能成功构建文库，且文库浓度正常，表明NR811可以兼容各种类型样本，并能兼容更低的投入量。

2. 特殊样本建库效果好

以6 μl血浆、血清、外泌体总RNA，及10 ng FFPE样本RNA和10 ng小鼠肝脏small RNA为起始模板，参照NR811及友商公司同类产品建库流程进行文库构建，使用 Qubit 检测文库浓度。

图2 NR811与友商公司同类产品在特殊样本上的文库产出浓度

结果显示，NR811在不同类型的特殊样本上均有更好的建库效果。

RL5 Adaptor，-85 ~ -65℃保存，干冰运输；

Filtration Column，15 ~ 25℃保存，室温运输；

其余组分，-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。

关键词:

rna

文库

样本

nr811

small

构建

特殊

试剂盒

投入

Q1：除Trizol裂解法提取总RNA外，能否使用离心柱法提取的总RNA作为起始模板？

A1：本试剂盒对总RNA的提取方式无特殊要求，如使用离心柱法提取试剂盒提取总RNA，请确保所使用的提取试剂盒不会损失small RNA。

Q2：RT primer能否在cDNA合成步骤添加？

A2: 不能。3’接头连接完成后加入的RT primer与多余3’接头反向互补形成双链结构，可以有效阻止5’接头与3’接头连接，从而减少接头二聚体的形成；另外，RT primer与已连上3’接头的RNA底物方向互补可作为逆转录步骤的引物，因此RT primer必须在3’接头连接完成之后添加，不能在cDNA合成步骤才添加。

Q3：低于检测下限的血浆、血清、外泌体RNA如何计算投入量？

A3: 若提取产物低于Qubit检测下限，推荐直接投入6 μl。

Q4：血浆、血清、外泌体RNA投入6 μl建库，接头如何稀释，扩增循环数如何选择？

A4: 推荐按照10 ng 总RNA投入的接头稀释倍数和扩增循环数进行反应，可根据实验结果进行调整。

Q5：RL5 Adaptor 可以放-20℃储存吗？

A5: RL5 Adaptor是RNA接头，若短期内能够使用完试剂盒可以暂放-20℃储存，若使用时间较久应于-80℃储存，防止RL5 Adaptor降解导致文库产出低。

Q6：3’接头连接过程中，分装13 μl连接mix时可以用涡旋仪代替移液枪吹打混匀吗？

A6: 不可以。因为RL3 Buffer V2和RL3 Enzyme mix V2比较粘稠，用涡旋仪无法彻底混匀，可能导致文库重复性差。

Q7：可以用琼脂糖凝胶或者蛋白胶代替非变性PAGE胶吗？

A7: 不可以。因为琼脂糖凝胶电泳较聚丙烯酰胺电泳的分辨率低，条带不能分开，影响后续割胶；蛋白胶和核酸胶中的缓冲Buffer不同，DNA电泳靠DNA骨架本身的负电荷，蛋白质电泳靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。