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    C603说明书-V22.1.pdf

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  • C603-pCE3 Blunt Vector.dna

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    2023-03-13 10:34:20
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Ultra-Universal TOPO Cloning Kit

兼容高效的拓扑克隆试剂盒
价格:
¥
750.0
市场价
0.0
浏览量:
1000
货号:
C603-01/02
所属分类
拓扑克隆
数量:
-
+
库存:
1998
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
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说明书
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Ultra-Universal TOPO Cloning Kit

兼容高效的拓扑克隆试剂盒

TOPO克隆,TA克隆,平末端克隆;片段保存,片段测序

·  兼容TA克隆和平末端克隆

·  克隆数多

·  阳性率高

本产品操作简便、反应快速,5 min 即可完成连接反应,克隆成功率高。产品采用了第四代拓扑异构酶(Topoisomerase),配合合适的buffer,使酶活性更高;添加二代平末端化因子,可连接高保真酶PCR扩增产物(平末端)与taq酶PCR扩增产物(末端带A碱基);搭配载体自连抑制因子,防止载体自连,减少假阳性,有效提高了克隆阳性率。本产品可用于目的片段克隆后长期保存及克隆后PCR产物的测序。

1. 克隆数多

测试12个体系,Vazyme #C603平板克隆数均优于同类型产品 Supplier A 和 Supplier B。

 

2. 阳性率高

连接末端带 A 碱基片段 (2kb、2.7kb) 和平末端片段 (500bp、2kb) 的阳性率为100%。

 

-30 ~ -15℃保存

关键词:
TOPO克隆,TA克隆,平末端克隆;片段保存,片段测序
C603
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:平板上长不出克隆/克隆很少/空载体

A1:插入片段必须为PCR产物,而不能为酶切产物,而且插入片段引物5’端不能为磷酸化;

A2:平板抗性为氨苄霉素;

A3:如果插入片段回收浓度较低(<20 ng/µl),需要重新制备插入片段,多管浓缩,以提升插入片段浓度;若插入片段回收浓度过高,需将其稀释以保证添加其体积数≥1 µl;

A4:按照说明书推荐公式对插入片段投入量进行计算,避免小体积(<1 µl)加入体系中,当计算投入量<5 ng时,按5 ng投入;

A5:反应建议在PCR仪中进行,推荐连接温度25℃。

 

Q2:菌液PCR无目的条带

A1:只有空质粒的条带,说明重组不成功,按照Q1排查提高连接效率。

A2:PCR体系或程序不合适:没有目的条带也没有空质粒条带,建议优化PCR体系,程序;或者提取质粒,以质粒为模板进行PCR验证;或者进行酶切验证

A3:PCR试剂不合适:试剂不适合菌液直扩,或者扩增片段太长,超出了试剂的使用范围

 

Q3:多数克隆含有不正确的插入片段

A1:PCR产物混有非特异性产物:优化PCR体系,提高特异性;胶回收PCR产物;鉴定更多的克隆;

A2:反应体系中混入了相同抗性的质粒:PCR扩增模板为环状质粒时,如扩增产物直接用于重组反应时需进行DpnⅠ消化,或者直接进行胶回收纯化。

 

Q4:插入片段出现碱基突变

A1:只测试了一个样本,不一定可信,需要多测几个样本;

A2:检查突变处的测序信号是否有问题,若为双峰或者杂峰不一定可信;

A3:如果多个结果突变位点一致,可能是从模板上引入的或者模板序列与NCBI上的不一致;

A4:制备插入片段时推荐使用高保真聚合酶;

A5:若引物处发生碱基突变,可能是引物合成问题,建议重新合成引物进行实验。

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