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    N512说明书 V23.2.pdf

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    2023-06-07 15:46:20
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VAHTS CA-28 Streptavidin Beads

广泛用途的蛋白、核酸分离工具——链霉亲和素磁珠
价格:
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N512-01/02
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VAHTS CA-28 Streptavidin Beads

广泛用途的蛋白、核酸分离工具——链霉亲和素磁珠

液相杂交捕获;免疫沉淀(IP、Co-IP);核酸蛋白互作研究(ChIP、RIP、Pull-down)等

兼容捕获试剂:N512磁珠适用于液体杂交捕获实验

高效地结合生物素修饰配体:1 mg(100 µl) N512磁珠能分别结合:游离生物素>950 pmol、约10 µg生物素修饰的dsDNA或10 µg生物素修饰的lgG

非特异性结合低:非生物素修饰的核酸结合率小于1%

操作体验感优:低吸附性,不沾壁

VAHTS CA-28 Streptavidin Beads是以亲水超顺磁性聚苯乙烯微球与高纯度链霉亲和素共价结合而成的链霉亲和素磁珠,游离生物素结合能力>950 pmol/mg。基于链霉亲和素(Streptavidin, SA)-生物素(Biotin)系统具有较高的结合亲和力的原理,本产品可快速高效地结合生物素修饰的核酸、抗体以及其他分子等,适用于核酸杂交捕获和分离。磁珠粒径均一,形态规整,具有良好的重复性和批间稳定性。

      1. 高效结合生物素修饰的配体

 

使用N512磁珠和A公司链霉亲和素磁珠,分别检测链霉亲和素磁珠结合生物素修饰配体的能力。结果显示,1 mg N512磁珠可以分别结合:约1500 pmol的游离生物素、约10 µg 生物素修饰的dsDNA或约10 µg生物素修饰的lgG。N512链霉亲和素磁珠可以高效地结合生物素修饰的配体且结合能力优于A公司同类产品。

      2. 良好的液相杂交捕获能力

以人血gDNA为模板,进行文库构建,分别使用N512磁珠和A公司同类型的磁珠搭配Vazyme全外显子捕获试剂(Vazyme#NC001,NC101,NC103)进行杂交捕获实验,结果表明,使用N512磁珠进行杂交捕获的捕获产出和中靶率与A公司磁珠基本一致。

      3. 兼容广

 

以人血gDNA为模板,进行文库构建,使用Vazyme公司和友商D公司的人全外显子杂交捕获试剂搭配N512磁珠和A公司磁珠进行液相杂交捕获。结果表明,N512磁珠和A公司磁珠均能兼容搭配Vazyme和D公司的杂交捕获试剂盒。

2 ~ 8℃保存,运输方式根据目的地进行

 

 

 

关键词:
N512-00
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Q1:为什么要进行磁珠预处理?

A1:预处理主要是去除磁珠储存液中防腐剂等物质(避免干扰后续实验)。

Q2:RNA捕获试剂中的Bio-R W Buffer中的NaOH,NaCl分别起到什么作用?

A2:NaOH可以提高核酸在溶液中的溶解度,有利于保存核酸;NaCI可以促进生物素修饰的核酸和链霉亲和素磁珠特异性结合。

Q3:N512是否可以直接用于PCR?

A3:N512可以直接用于PCR。每50μl的PCR反应使用100μl(1mg)的磁珠,不会对扩增反应产生任何抑制。推荐客户重新测试其使用的PCR反应中引入磁珠量的抑制情况,因为测试中不同的盐条件可能产生不同的结果。

Q4:N512能否用于单链DNA制备?

A4:可以,N512可用于分离单链DNA。通过使用只有一条生物素修饰的引物和另一条正常无生物素修饰引物进行PCR扩增目的片段,高温或强碱处理使双链DNA变性,再使用N512特异性结合带有生物素的一条链,从而得到大量的单链DNA。

Q5:如何洗脱N512链霉亲和素磁珠结合的生物素化核酸?

A5:打破生物素-链霉亲和素的结合需要苛刻的条件。为了从N512链霉亲和素磁珠中分离生物素化DNA,向磁珠-DNA复合物中加入95%甲酰胺溶液后,65℃加热5 min或90℃加热2 min,即可使链霉亲和素磁珠和生物素化DNA分离。若需要进一步从甲酰胺溶液中纯化样品,推荐使用VAHTS DNA Clean Beads(Vazyme #N411),获得纯净的目的核酸。

Q6:如何从N512链霉亲和素磁珠中洗脱非生物素化核酸链?

A6:两条DNA链的分离可以通过碱处理或高温处理来完成。
使用碱处理时,非生物素化链可以用0.1 M NaOH洗脱。这种处理通常不会对磁珠产生任何影响。将新鲜制作的(这至关重要)0.1M NaOH添加到磁珠-DNA复合物中,并在室温下旋转孵育2-3分钟(最多5分钟)。将含有非生物素化链的上清液放置其他EP管中。用0.1M NaOH再次洗涤磁珠-DNA复合物并移除上清液。大多数非生物素化的DNA会在第一次洗脱过程中脱落。
在高温处理时,将磁珠-DNA复合物置于水/金属浴中95°C,加热5分钟即可使非生物素链分离下来。注意该方法会造成一定程度的生物素化核酸从链霉亲和素磁珠上解离,因此更推荐使用碱处理法洗脱。

Q7:如何洗脱N512链霉亲和素磁珠结合的生物素化蛋白?

A7:加入0.1% SDS溶液或含有SDS的蛋白loading buffer后,煮沸5 min即可洗脱蛋白。若下游进行LC-MS分析时,也可直接向磁珠/蛋白复合物中加入胰蛋白酶进行消化处理。具体处理条件根据LC-MS样本处理需求调整。

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