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    R411说明书V23.1.pdf

    大小:
    2023-03-29 16:33:12
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VeZol Reagent

经典的传统Trizol,助力高质量RNA提取
价格:
¥
600.0
市场价
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浏览量:
1000
货号:
R411-01/02
所属分类
沉淀法提取
数量:
-
+
库存:
19997
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
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说明书
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VeZol Reagent

经典的传统Trizol,助力高质量RNA提取

RNA提取,产物可用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验

高兼容:适用于多种细胞、动物组织、植物样本的RNA提取

高产量:裂解能力强,能获得更多的RNA

VeZol Reagent适用于从多种培养细胞、动物组织、植物组织等样本中分离出高质量的Total RNA。VeZol Reagent是基于苯酚和异硫氰酸胍组成的单相溶液,搭配优化后的专有成分,裂解样本和抑制RNase能力更强。VeZol Reagent快速裂解样本,经氯仿抽提后,分为上清层(含RNA)、中间层和红色的有机层,用异丙醇沉淀、乙醇洗涤得到产量和纯度高的Total RNA。获得的Total RNA可以直接用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验。

      1. 样本适用范围广

使用Vazyme #R411对不同动物组织(包括水产、昆虫)、培养细胞、简单植物和大型真菌样本进行RNA提取,并对产物进行琼脂糖凝胶电泳检测(图1),结果显示Vazyme #R411对多种类型的样本均具有广泛的兼容性。

注:R表示大鼠。(例如,R-肝脏为大鼠肝脏组织)

图1 不同样本提取产物电泳图

 

2.提取产量高

使用Vazyme #R411与其他同类产品(分别来自A、B公司,Vazyme #R401),对不同动物组织和培养细胞进行总RNA提取,并进行浓度测定和琼脂糖凝胶电泳检测(图2)。结果表明,Vazyme #R411提取的RNA产量和完整性均较好。

图2 不同产品对动物组织和细胞RNA提取性能展示

3.下游适用性强

使用Vazyme #R411与A公司相关产品提取293细胞RNA,qPCR检测mRNA(β-actin)和miRNA(U6)的表达。结果说明,Vazyme #R411可较好的应用于下游定量实验(图3)。

图3  不同产品提取293细胞RNA qPCR定量结果

组分

R411-01

R411-02

VeZol Reagent

100 ml

200 ml

 

2 ~ 8℃避光保存,室温运输。

关键词:
R41102
R411-00
2023论文回顾
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Q1:R411相比R401升级点有哪些?

A:1)兼容性更广:相比R401能兼容更多的动、植物组织;

      2)产量更高:相比于R401产量有效提升;

      3)纯度更好:相比于R401复杂样本下游Ct检出较好;

      4)完整度更好:对于杂质/RNase含量高的样本提取RNA完整度比R401更好;

      5)操作体验更佳:贴壁细胞裂解能力提升,颜色比R401更显著。

Q2:RNA得率低?

A:   1)样本裂解或匀浆不充分:减少样本投入量,或将组织样本切成小块,充分研磨或匀浆,以确保完全裂解。

      2)RNA沉淀未完全溶解:可在55 ~ 60℃的水浴中孵育10 - 15 min促进RNA沉淀的溶解。

Q3:RNA发生降解?

A: 1)存在RNase污染:

     a. 确保所有提取试剂和器具未被RNase污染,耐高温器具可于150℃烘烤4 - 6 h以去除RNase,其它器具可用0.1%的DEPC水浸泡过夜;

     b. 做好防护工作,戴口罩和一次性干净手套,并在单独的洁净区操作。

    2)样本保存或处理不当:

     a.  若不能立即提取,应将离体组织迅速投入液氮冷冻,并用液氮保存;或液氮速冻后,转移至-85 ~ -65℃保存。不要直接将组织放在-85 ~ -65℃冷冻,速冻过程缓慢,内源RNase可能会将RNA降解;

     b.  针对不具备液氮速冻条件的情况,可将新鲜组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中,室温可存放一周,2 ~ 8℃存放一个月,-30 ~ -15℃(或-85 ~ -65℃)长期保存;

     c. 样本取出后立即加入VeZol Reagent,并迅速进行后续操作,避免内源RNase降解RNA。

     3)样本内源RNase含量高:

     a. 减少样本投入量;

     b. 采用液氮研磨的处理方式,过程中样本始终保持超低温;

     c. 使用2 ~ 8℃预冷的VeZol Reagent进行样本裂解。

     4)RNA产物保存不当:取少量样本检测,其余分装后在-85 ~ -65℃保存。电泳检测可提高电压并缩短电泳时间(建议220 V,10 min),同时对电泳缓冲液冰浴降温,防止电泳过程中RNA发生降解。

Q4:有基因组污染?

A: 1)离心温度不当:加入氯仿后,需在低温(2 ~ 8℃)下高速离心。

    2)取水相操作不当:吸取水相需小心,可适当保留,切勿吸到中间层和下层,避免基因组污染。

    3)样本含有丰富的基因组:样本裂解后按1 ml VeZol Reagent加入5 µl冰醋酸混匀,进行后续操作。

Q5:提取的样本纯度低?

A:1)杂质、盐离子残留:

      a. 增加75%乙醇(用RNase-free ddH2O配制)洗涤沉淀的次数;

      b. 在异丙醇和75%乙醇洗涤后尽可能弃尽上清。

     2)产量过低会导致OD260/OD230偏低。建议按照说明书建议优化提取流程提高产量。

Q6:加入异丙醇离心后看不见沉淀?

A:1)RNA含量低或组织投入量过低:

     a. 取上层水相,加5 - 10 µg RNase-free糖原作为载体与RNA共沉淀;

     b. 加入异丙醇后,可2 ~ 8℃或-30 ~ -15℃放置10 - 30 min后离心,且在异丙醇和75%乙醇洗涤后弃上清时,请勿倒掉或吸走RNA沉淀。

     2)样本中含较多的代谢产物:由于部分组织样本含较多代谢产物,导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上,此时,请沿液面缓慢吸取上清,防止倒掉或吸走RNA沉淀。

Q7:R411可以在哪些步骤暂停保存?

A:R411样本加Trizol/加氯仿后:在-80℃、-20℃可保存一个月,4℃可保存两周;取上清/加异丙醇/加75%乙醇后:在-80℃、-20℃、4℃可保存一个月。不建议在Trizol流程中的关键节点将样本长期放置于室温(25-37℃),有RNA降解的风险。

组分

R411-01

R411-02

VeZol Reagent

100 ml

200 ml

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