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180 kDa Plus Prestained Protein Marker

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    2023-06-16 17:34:14
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180 kDa Plus Prestained Protein Marker

三色预染,色彩鲜明
价格:
¥
635.0
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货号:
MP201-01/02
所属分类
Western Blot
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-
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说明书
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180 kDa Plus Prestained Protein Marker

三色预染,色彩鲜明

Western Blot,蛋白电泳,转膜指示

三色预染

180 kDa Plus Prestained Protein Marker由三种颜色预染的11种不同分子量大小的蛋白质组成,分子量范围为12 - 180 kDa。其中70 kDa 为橙红色条带,12 kDa、15 kDa、20 kDa、35 kDa、40 kDa、55 kDa、100 kDa、130 kDa、180 kDa为蓝色条带,25 kDa为绿色条带。本产品用于SDS-PAGE实验中,可清晰地指示电泳进程,较为准确地判断目标蛋白的分子量;在Western blot实验中,可用于监测PVDF膜或NC膜的转膜效果以及判断目标蛋白的检测情况;本产品可应用于Tris-Glycine胶和Bis-Tris胶的不同缓冲液体系(Tris-Glycine、MOPS和MES),本产品的蛋白条带均经非预染蛋白Marker校准,条带大小准确。本品推荐上样量为5 µl。

-30 ~ -15℃保存

关键词:
MP20102
蛋白电泳
Western Blot
转膜指示
MP201-00
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Q1:蛋白Marker降解?

A1:(1)由于环境因素或操作不当,致使产品内引入杂质,导致蛋白构象发生变化。请确保实验操作规范。建议将Marker进行分装,避免反复冻融。

       (2)模具、凝胶、缓冲液、移液器、移液器吸头或设备在使用过程中可能会被蛋白酶污染。一般建议是避免在同一房间内使用蛋白酶。我们建议准备新鲜的溶液、清洁设备并使用干净的移液器和吸头。

Q2:蛋白Marker是否可以跑磷酸化检测蛋白胶?

A2:不建议,本产品内含有EDTA可能会引起条带弯曲或拖带,如需使用,可加等量金属离子改善。

Q3:蛋白Marker能否跑非变性电泳?

A3:不可以,本产品已变性并还原,仅适用于SDS-PAGE实验。

Q4:蛋白Marker是否能跑预制胶?

A4:可以,本产品兼容多种厂家生产的预制胶以及预混液(Tris-Gly,Bis-tris)。

Q5:蛋白Marker颜色较淡,很模糊?

A5:(1)上样量过低,推荐使用5μL(可适量增加上样量),不可过高,会导致拖尾。

(2)蛋白质上样过多会导致模糊,这个问题在使用银染凝胶时尤为突出。

(3)蛋白胶浓度过低,导致蛋白Marker略微弥散,建议使用高浓度蛋白胶。

Q6:蛋白Marker部分转移不上?

A6:(1)增加电压、电流或转印时间。

     (2)凝胶和SDS-蛋白质复合物中的SDS会促进蛋白质从凝胶中洗脱,但抑制蛋白质与膜的结合。这种抑制作用在硝化纤维素膜上的强度大于PVDF膜。对于难以从凝胶中洗脱的蛋白质,如大分子量蛋白质,可在转膜缓冲液中加入少量SDS以改善转印效果。我们建议在组装三明治前将凝胶置于含0.02–0.04% SDS的2x转膜缓冲液(无甲醇)中预平衡10分钟,然后使用含10%甲醇和0.01% SDS的1X转膜缓冲液进行转印。

     (3)甲醇可去除SDS-蛋白质复合物中的SDS,促进蛋白质与膜的结合,但对凝胶本身有一些不良影响,会降低转印效率。甲醇可能导致孔径减小、某些蛋白质发生沉淀以及一些碱性蛋白质带正电荷或变为中性。应确保转膜缓冲液的甲醇浓度不高于10–20%,并使用高质量的分析级甲醇。

Q7:蛋白Marker能显影?

A7:蛋白Marker可能与一抗/二抗发生非特异性相互作用。非特异性交叉反应很难预测,它通常具有不同的模式,具体取决于所使用的抗体。如果抗体识别线性表位,则交叉反应可能是由于序列同源性。如果抗体与抗变性构象表位发生反应,则可能无法确定检测到交叉反应的确切原因。

Q8:是否存在任何动物来源的蛋白质?

A8:该产品蛋白均来自于重组原核蛋白,不含有任何动物源性蛋白。

Q9:蛋白Marker没有很好的分离条带?

A9: (1)蛋白Marker被煮沸,丢弃。

         (2)上样量过度,建议减少上样量或适量稀释。

Q10:蛋白Marker在Tris-Gly和Bis-tris上迁移率不同?

A10: 预染标准品具有与每种蛋白质共价结合的染料,这将导致标准品在不同的缓冲系统(即不同的凝胶)中迁移率不同。预染蛋白Marker可用于分子量估算、确认凝胶迁移和估算转膜效率,但对于需要更准确地估算分子量的应用,应使用非预染标准品。

Q11:使用的蛋白Marker电泳中发现一些额外的条带?

A11:(1)上样时,请注意确保相邻样品泳道没有交叉污染。

        (2)适当减少上样量。

        (3)储存不当或反复冻融会导致蛋白质降解。

Q12:为什么预染蛋白Marker不显示真实的条带大小?

A12:发色团与蛋白质的偶联会影响 SDS-PAGE 中蛋白质相对于未染色蛋白Marker表观分子量。预染蛋白Marker的表观分子量与非预染蛋白Marker校准,但预染蛋白Marker在其他电泳缓冲液和凝胶系统中可能具有不同的迁移率。还应注意的是,通过凝胶电泳确定蛋白质的大小并不能给出确切的值,它取决于蛋白质序列和修饰后的大小。

Q13:膜上的蛋白Marker颜色为什么会在1×TBST溶液的洗涤中变浅?

A13:褪色很可能是由于西方封闭/洗涤溶液中的洗涤剂可以从膜上去除一些蛋白质。染料本身不会从蛋白质上洗掉,因为它是共价结合的。我们发现孔径较小的膜在封闭和洗涤过程中能更好地保留蛋白质,因此建议使用 0.2 µm 而不是 0.45 µm 的膜以获得更好地分辨率和蛋白质保留。转移后,可用铅笔在膜上圈出预染条带,以便后续实验中识别。

Q14:发现低分子量蛋Marker穿过了膜?

A14:(1)增加电压、电流或转印时间。

          (2)确保转移缓冲液中的甲醇浓度合适;使用 10-20% 的甲醇浓度 甲醇从 SDS-蛋白质复合物中去除 SDS 并提高蛋白质与膜的结合。

Q15:分子量较小的Marker分不开怎么办?

A15:可能是分离胶浓度低造成的,推荐使用较高浓度的分离胶,有助于小分子条带更加分散,便于观察。

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