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    EM701(单页版说明书)V23.1.pdf

    大小:
    2023-08-10 10:29:53
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BioSmart MethyLight qPCR Mix

甲基化检测专用的探针法qPCR预混液
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EM701-01/02
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BioSmart MethyLight qPCR Mix

甲基化检测专用的探针法qPCR预混液

肿瘤甲基化、肿瘤早筛

  • 甲基化qPCR专用预混液:适用于亚硫酸盐转化DNA模板甲基化qPCR检测,耐亚硫酸盐、耐U,具有较高的成功率
  • GC兼容性广:能够广泛兼容 GC 含量范围为 20%~75%的各类体系
  • 样本适应性好:适用于粪便提取物、脱落细胞、血液、肺泡灌洗液、质粒等常见样本提取转化产物,用于多癌种检测
  • 荧光值高:更高的荧光平台值,扩增线型更优

BioSmart MethyLight qPCR Mix使用BioSmart平台,系统地对酶的亚硫酸盐耐受性,不同样本提取转化产物的适用性,GC含量的兼容性,耐尿嘧啶以及3'端错配碱基识别能力进行筛选,显著提升了DNA甲基化应用场景下多重靶标的灵敏度、特异性、低拷贝检出率,可得到重复性好,扩增线型优异,靶基因定量和检测准确的结果。本产品是一款2 ×预混液,只需额外加入引物、探针、模板即可,使用方便。

1. 甲基化qPCR专用预混液:

适用于亚硫酸盐转化DNA模板甲基化qPCR检测具有优越的扩增线型,更高的荧光平台值。

图1.不同试剂扩增亚硫酸转化后的DNA比对

 

2. GC兼容性广

甲基化检测的CpG岛区域,在甲基化转化后存在GC含量跨度大,因此需要一款可同时兼容高低GC的qPCR试剂。Vazyme #EM701能够广泛兼容 GC 含量范围为 20%~75%的各类体系,减少由于扩增偏好性对检测结果的影响。

图2.不同GC含量的甲基化模板的扩增情况比对

红色:Vazyme #EM701,蓝色:Supplier D

 

3.良好的样本适应性:

对于常见癌种检测的样本均具有良好的样本适应性,如:粪便提取物、脱落细胞、血液、肺泡灌洗液、等常见样本提取转化产物;可用于多癌种的检测。

图3.Vazyme #EM701在不同样本中的扩增情况

红色:Vazyme #EM701,绿色:Supplier D

 

 

组分

EM701-01

200 rxns (20 μl/rxn)

EM701-02

500 rxns (20 μl/rxn)

2 × BioSmart MethyLight qPCR Mixa

2 × 1 ml

5 × 1 ml

a. 包含dNTP Mix,Mg2+,BioSmart MethyLight DNA Polymerase等。

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

 

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

◇ 扩增曲线形状异常

① 扩增曲线不光滑:信号太弱,经系统矫正后产生;提高模板浓度重复实验。

② 扩增曲线断裂或下滑:模板浓度较高,基线的终点值大于CT值。减小基线终点(CT值 - 4),重新分析数据。

③ 个别扩增曲线突然骤降:反应管内留有气泡。处理样本时要注意离心,进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

 

◇ 反应结束无扩增曲线出现

① 反应循环数不够:一般设置循环数为45,但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

② 确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃

延伸阶段。

③ 确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除其降解的可能。

④ 模板浓度太低:减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从原浓度做起。

⑤ 模板降解:重新制备模板,重复实验。

 

◇ CT值出现太晚

① 扩增效率偏低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计合成引物。

② 模板浓度太低:降低稀释倍数重复实验,一般未知浓度的样品先从原浓度做起。

③ 模板降解:重新制备模板,重复实验。

④ PCR产物太长:推荐PCR产物长度为80 - 150 bp。

⑤ 体系中存在PCR抑制剂:一般为模板带入,提高模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。

 

◇ 阴性对照出现明显扩增

① 反应体系污染:更换新的Mix、ddH2O、引物、探针重复实验。

 

◇ 绝对定量时标准曲线线性关系不佳

① 加样误差:提高模板稀释倍数,提高加样体积。

② 标准品降解:重新制备标准品,重复实验。

③ 模板浓度太高:提高模板稀释倍数。

 

◇ 实验重复性差

① 加样体积失准:使用性能较好的移液枪;提高模板稀释倍数,提高加样体积。

② 定量PCR仪温度控制孔间差异大:定期校准仪器。

③ 模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

组分

EM701-01

200 rxns (20 μl/rxn)

EM701-02

500 rxns (20 μl/rxn)

2 × BioSmart MethyLight qPCR Mixa

2 × 1 ml

5 × 1 ml

a.包含dNTP Mix,Mg2+,BioSmart MethyLight DNA Polymerase等。

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