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Recombinant Enterokinase/Recombinant Enterokinase(Tag-free)

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Recombinant Enterokinase/Recombinant Enterokinase(Tag-free)

高特异性重组肠激酶
价格:
¥
430.0
市场价
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货号:
RM1011/RM1012
所属分类
蛋白酶
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-
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Recombinant Enterokinase/Recombinant Enterokinase(Tag-free)

高特异性重组肠激酶

  • 用于切除重组蛋白N端融合标签
  • 用于活化胰蛋白酶原
  • 生物制药领域常用于重组蛋白、多肽类药物的生产制备,例如GLP-1及其类似物等

肠激酶(Enterokinase,EK)是一种高度特异性的丝氨酸蛋白酶,可以专一识别DDDDK序列并在赖氨酸残基的C端进行切割。本品为重组牛源肠激酶轻链片段,可以在较宽的pH范围(4.5-9.5)和温度范围(4-45℃)内进行有效切割。Vazyme提供有His-tag和无His-tag两种肠激酶,客户可结合应用场景和纯化去除工艺进行选择。

产品名称

Recombinant Enterokinase/Recombinant Enterokinase(Tag-free)

来源

牛源

表达宿主

重组E.coli

性状

透明的,无色或淡黄色液体

活性

15~30 U/µl

纯度(HPLC)

≥95%

分子量

25.8±2.6kDa

活性单位定义

在 25℃,12h-16h 之内,将 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl(pH8.0)缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量,定义为 1U。

储存条件

-30 ~ -15℃

有效期

2年

1. 质量高:纯度高,特异性好;

2. GMP级:生产过程符合GMP要求,可提供完整的质量文件;

3. 无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源原料,无外源性病毒污染;

4. 供应稳定:质量和批量稳定,可保障稳定供应;

5. 标签选择:提供有His-tag和无His-tag两种肠激酶,客户可结合应用场景和纯化去除工艺进行选择;

6. 规格定制:规格可根据客户需求定制。

组分 RM1011-00 RM1011-01 RM1011-02 RM1011-03
Recombinant Enterokinase 100 U 1000 U 10 KU 100 WU
组分 RM1012-00 RM1012-01 RM1012-02 RM1012-03
Recombinant Enterokinase(Tag-free) 100 U 1000 U 10 KU 100 WU

储存稳定性:保存在-20℃以下,2年内稳定;

运输稳定性:干冰保温运输,运输过程不融化,活性稳定。

 

 

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1、有哪些常见影响肠激酶发挥活性的因素? 如何解决?

在>200mM咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油条件下,酶切效果受影响,可将样品进行稀释或者透析,再进行酶切。如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。磷酸盐对Enterokinase发挥活性有影响,因此尽量避免酶切体系内磷酸盐的存在。

2、融合蛋白的使用量?及酶切温度和酶切时间?

重组 EK:200-2000U 可酶切融合蛋白:0.1-1g/L (1L)

反应时间:25℃反应过夜或者 24h,用 SDS-PAGE 或者 HPLC 检测酶切效果。

                 4℃反应酶切,需要将酶切时间延长至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。

3、使用pH和缓冲液体系是什么?

25mM Tris-HCl,pH 8.0@25℃。

4、如何在纯化过程中去除rEK酶?

本司生产的肠激酶比活高,使用过程中加量较少,可不考虑其除去。如果确实需要去除rEK,建议的去除方法如下:

a. 使用亲和层析,可以利用苯甲亲和填料纯化去除,由于肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶,可以在纯化时与苯甲填料结合,从而达到纯化目的。

b. 使用离子交换填料,pH8.0条件下,肠激酶与DEAE填料结合,并且在0.15M NaCl中可以被洗脱。可以利用目的蛋白与肠激酶电荷以及与DEAE胶的结合以及洗脱的不同条件将二者进行分离。

c. 我们同时提供有His-tag和无His-tag两种肠激酶,可分别使用Ni柱亲和层析吸附和穿透去除。

组分 RM1011-00 RM1011-01 RM1011-02 RM1011-03
Recombinant Enterokinase 100 U 1000 U 10 KU 100 WU
组分 RM1012-00 RM1012-01 RM1012-02 RM1012-03
Recombinant Enterokinase(Tag-free) 100 U 1000 U 10 KU 100 WU
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