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Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

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- 猪病检测试剂

Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2-V20.1.pdf

大小：

2020-11-23 10:50:06

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7161

Mut Express MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

MutExpress®MultiSFastMutagenesisKitV2 一步法多点突变试剂盒 ● Phanta®MaxSuper-FidelityDNAPolymerase提供突变率最低的高保真PCR● Phanta®MaxSuper-FidelityDNAPolymerase卓越的长片段扩增能力，广泛适用于20kb以内任何质粒的扩增● 扩增以指数方式进行，模板使用量极低，有利于原始甲基化

价格：

1280.0

市场价

元

1280.0

浏览量:

7161

货号：

C215-01/02

所属分类

快速定点突变

数量：

库存:

79968

*具体价格咨询当地业务员

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说明书

相关文献

Mut Express^®MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

一步法多点突变试剂盒

Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase提供突变率低的高保真PCR

Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase优异的长片段扩增能力，广泛适用于20 kb以内任何质粒的扩增

扩增以指数方式进行，模板使用量低，有利于原始甲基化模板的彻底降解

ClonExpress^®快速克隆系统高效环化PCR产物

DpnI消除原始模板污染

可一步实现目标质粒上三至五个不连续位点(相距超过50 bp)的定点突变

提供在线引物设计软件CE Design

使用Mut Express^® MultiS 进行不连续三点突变实验流程：

以待突变位点A、B、C 为界，将质粒分为AB、BC 和CA 三段。在每个待突变位点处设计部分反向互补的引物。以原始质粒为模板，分别扩增AB 段(A Forward Primer 和B Reverse Primer)、BC 段(B Forward Primer 和C Reverse Primer) 和CA 段(C Forward Primer和A Reverse Primer) (I)。扩增产物经DpnI消化(I) 后，进行重组环化(II)。重组产物直接进行转化即可完成定点突变(III)。

Mut Express^® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 是基于ClonExpress^® 快速克隆技术的多位点定点突变系统。使用本试剂盒，可一次性向目标质粒上三至五个不连续位点同时引入定点突变。该试剂盒由Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase 扩增模块和ClonExpress^®快速克隆模块组成。Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase 较高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性。ClonExpress^® 快速克隆系统利用高效同源重组技术替代了传统的退火成环反应，大大提高了环化效率。使用Mut Express^® MultiS 定点突变试剂盒进行DNA 定点突变时，引物设计灵活、模板需求量低，且如扩增产物特异，DpnI 消化后可不进行DNA 纯化而直接用于重组反应。专门针对多位点定点突变而优化的重组酶、高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及惊人的定点突变效率，使得Mut Express^® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2 成为DNA 多点突变选用试剂盒。

- 20℃储存

关键词:

C215-01/02

一步法多点突变试剂盒

Q1：点突变引物设计

引物由两部分组成：反向互补序列（15-20 bp，GC含量40%-60%）+非互补序列（至少15bp)，待突变位点至引物3'端Tm值>60℃为佳，待突变位点至引物5'端区域内碱基不应参与Tm值计算。
引物设计：官网引物设计软件CE Design，选择相应模块进行设计。

Q2：质粒模板无法正常扩增

引物设计有误：核对引物设计方案，建议用官网引物设计软件CE Design进行设计。
模板质粒：质粒质量偏差会影响扩增效率，长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的质粒作为模板（建议质粒模板测序验证序列无问题）；质粒如果太大（>9kb），扩增有一定的难度。
扩增体系：质粒模板投入量过多，模板投入量过多会抑制PCR反应，导致PCR产物很少，建议50μl体系投入1ng质粒模板；检查体系配制是否错误。
扩增反应条件需优化：调整Mg²⁺浓度、酶量、摸索退火温度等。
若质粒过长不容易扩增或扩增效率极低，可以将单碱基突变方案改为双碱基突变：其中一个位点不进行碱基修改即可。

Q3：平板上长不出克隆或者克隆数很少。

感受态效率低：使用新制备或妥善冻存的感受态细胞，确保转化效率需＞107 cfu/μg。每次可设置一组转化质粒的对照试验，以检测感受态细胞的转化效率；
重组反应体系中DNA量不足或比例不佳（双碱基突变）：尽量按照说明书推荐的量配置重组体系。请务必预先检测DpnI消化产物的浓度。常用的吸光度测量法极易受DNA纯度、DNA稀释液pH等因素影响，测定值和DNA实际浓度往往偏差非常大；
重组环化反应体系中DNA不纯，抑制反应：未纯化DpnI消化产物加入重组体系内的总体积不应超过4ul（反应体系体积1/5）。尝试对DpnI消化产物进行胶回收纯化。重组反应体系中应尽量避免金属络合剂（如EDTA）的带入。因此，我们推荐您将DNA纯化产物溶解在pH8.0的ddH₂O中保存（常规胶回收试剂盒中的洗脱液可用pH8.0的ddH2O替代），请勿使用TE进行DNA保存；
感受态细胞中加入了过多的反应产物：反应产物的转化体积不应超过感受态细胞体积的1/10，否则会降低转化效率；
出现转化抑制效应：当转化的DNA浓度太高时，会抑制转化反应，将重组反应产物稀释5倍后取1/5进行转化。