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PNGase F(套装)

一款释放N-连接糖的糖苷内切酶
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货号:
RM1023KA/RM1024KA
所属分类
其他蛋白
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PNGase F(套装)

一款释放N-连接糖的糖苷内切酶

1. 从糖肽及糖蛋白上释放完整的 N-连接糖

2. 表征蛋白质是否糖基化

3. 用于分子量检测或晶体学研究时去糖基化蛋白质的制备

4. N-糖基化糖蛋白的结构和功能研究

5. 糖基化位点的确定

PNGase F 是一种主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌的酰胺水解酶,本制品为 E. coli  表达的和平空间站伊丽莎菌(Elizabethkingia miricola,formerly Flavobacterium meningosepticum)基因编码的重组蛋白。PNGase 可以将N-连接糖蛋白的高甘露糖、杂化和复合寡糖从蛋白上切开,切割位点发生在最内侧的 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺残基之间的酰胺键,酶切后天冬酰胺转变为天冬氨酸(图1)。

诺唯赞同时提供无甘油版本PNGase F(Glycerol-free),供需进行HPLC和/或质谱等下游分析的客户选用。

1. PNGase F 几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有 N-连接糖

2. 无糖苷内切酶F1、F2和F3活性

3. 能在自然或变性条件下使用

4. 纯度≥95%

某糖基化蛋白采用PNGase F处理前后结果:

 

使用方法

1.用去离子水溶解 1-20 μg 糖蛋白,加入 1 μl 的 PNGase F Buffer1 (10×),用去离子水定容到 10 μl ;

2.100°C 孵育 10 min;

3.加入2 μl 的 PNGase F Buffer2 (10×),2 μl 的 PNGase F Buffer3 (10%),轻轻吹打混匀;

4.加入 1-2 μl 的 PNGase F,加去离子水到 20 μl ,轻轻吹打混匀;

5.37°C 孵育 60 min;

6.用于 SDS-PAGE 分析或 HPLC 分析。

组分 成分 RM1023KA-00 RM1023KA-01
PNGase F(糖苷酶) N/A 15000 U 75000 U
PNGase F Buffer1 (10×) 5% SDS, 400 mM DTT 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer2 (10×) 500 mM Sodium Phosphate(pH 7.5 @ 25°C) 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer3 (10%) 10% NP-40 1 ml 1 ml

 

组分 成分 RM1024KA-00 RM1024KA-01
PNGase F(Glycerol-free) N/A 15000 U 75000 U
PNGase F Buffer1 (10×) 5% SDS, 400 mM DTT 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer2 (10×) 500 mM Sodium Phosphate(pH 7.5 @ 25°C) 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer3 (10%) 10% NP-40 1 ml 1 ml

 

保存:-30 ~ -15℃保存,12个月稳定,避免反复冻融;

运输:干冰运输。

关键词:
RM1023KA-00
RM1024KA-00
RM1023KA-01
RM1024KA-01
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Q1:PNGase F可以耐受哪些试剂成分?

A1:在1.0%左右的去垢剂存在时,酶活几乎不受影响;

稳定试剂,非洗涤剂和微量有机溶剂会微弱影响反应速率;

尿素对PNGase F的活性有一定影响,低浓度下(<5 M)可保留部分活性;

SDS对PNGase F的活性有影响,若在变性条件下反应,需添加终浓度为1%的NP-40从而抵消影响。

Q2:变性和非变性条件下蛋白去糖基化的区别是什么?

A2:蛋白质不变性处理,其二级和三级结构会阻碍PNGase F到达碳水化合物的切割位点,所以在非变性条件下进行去糖基化处理时,可能需要增加一定酶量和/或延长反应时间。

组分 成分 RM1023KA-00 RM1023KA-01
PNGase F(糖苷酶) N/A 15000 U 75000 U
PNGase F Buffer1 (10×) 5% SDS, 400 mM DTT 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer2 (10×) 500 mM Sodium Phosphate(pH 7.5 @ 25°C) 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer3 (10%) 10% NP-40 1 ml 1 ml

 

组分 成分 RM1024KA-00 RM1024KA-01
PNGase F(Glycerol-free) N/A 15000 U 75000 U
PNGase F Buffer1 (10×) 5% SDS, 400 mM DTT 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer2 (10×) 500 mM Sodium Phosphate(pH 7.5 @ 25°C) 1 ml 1 ml
PNGase F Buffer3 (10%) 10% NP-40 1 ml 1 ml
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