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HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit(+gDNA wiper)

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    R412(单页版说明书)V23.1.pdf

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    2023-09-19 14:24:38
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HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit(+gDNA wiper)

“All-round” 效率与速度并存的cDNA一链合成试剂盒
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HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit(+gDNA wiper)

“All-round” 效率与速度并存的cDNA一链合成试剂盒

逆转录;第一链cDNA合成(含gDNA去除);PCR;qPCR

HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript系列第四代一链cDNA合成试剂,可使用Total RNA或Poly A+ RNA为模板合成第一链cDNA。相较于前代产品,HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)进一步提升了逆转录效率:包括更强的延伸能力、更快的反应速度以及更高的抑制物耐受程度,尤其适合下游qPCR定量反应和长片段cDNA扩增。本产品提前预混了HiScript IV RTase、RNase inhibitor、dNTP Mix等,使用时只需要根据下游实验添加适当的逆转录引物。本试剂盒提供基因组去除模块,试剂盒中的5 × gDNA wiper Mix 可在42℃,2 min条件下快速去除基因组DNA污染,保证实验数据真实可靠。

 

更强的延伸能力:R412逆转后可扩增出长达15 kb的长片段cDNA

更高的逆转录效率:与市售其他逆转录试剂相比,R412可得到更小的CT

更快的反应速度:5 min完成逆转录反应

1. 更强的延伸能力

以 293T细胞总RNA为模板,使用Vazyme #R412、Vazyme #R312及市售其他逆转录产品(SupplierA、B)按照相同时间进行逆转录反应,将得到的cDNA使用2 × Vazyme LAmp Master Mix (Dye Plus)(Vazyme #P312)扩增不同片段长度的目的片段。从图中可以看出,测试的逆转录酶均可以合成9.9 kb的cDNA片段,而合成15 kb的cDNA片段时,R412相较于R312拥有更高的cDNA产量,且明显优于SupplierA、B相关逆转录产品。

 

 

2. 更高的逆转录效率

以100 ng的动物细胞,动物组织及植物组织RNA为模板,使用Vazyme #R412、Vazyme #R423、Vazyme #R312及市售其他逆转录试剂(SupplierA、B),按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应,将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析,从图中可以看出Vazyme#R412与Vazyme #R423在不同的测试体系下都获得了更低的CT值,超过了Vazyme #R312及SupplierA、B相关逆转录产品。

 

 

注:△CT = CT (各品牌逆转录产品) – CT (Vazyme #R412)

3. 更快的反应速度

以293T细胞总RNA为模板,使用Vazyme #R412、Vazyme #R312及市售其他逆转录产品(SupplierA、B)按照说明书程序使用不同的逆转录时间(5 min、10 min、15 min、30 min)逆转录反应,cDNA产物使用P312扩增9.9 kb目标片段。从图中可以看出,大多数逆转录酶在30 min的逆转时间下可以有效扩增9.9 kb的cDNA条带,然而逆转录时间为5 min时,R412依然表现出良好的逆转录效率,优于Vazyme #R312及SupplierA、B相关逆转录产品。

 

- 30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

关键词:
表达载体构建解决方案
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Q1:后续实验为PCR时,逆转录时间可以延长吗?

A1:后续实验为PCR时,cDNA的产量与反应时长有关,R412可以在5min合成15kb的cDNA片段,增加反应时间可以提升cDNA的产量。

 

Q2:后续实验为PCR时,反应温度为50℃?

A2:R412中逆转录酶的适宜反应温度在37~50℃之间。针对全长cDNA的逆转,50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。

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