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    HP101(单页版说明书)V23.1.pdf

    大小:
    2023-09-19 14:35:03
  • cp

    HisGrip Elite实验指导手册 HP101-V23.1.pdf

    大小:
    2023-11-02 09:11:48
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HisGrip Elite

告别透析无需重生,蛋白纯化飞速搞定!
价格:
¥
580.0
市场价
0.0
浏览量:
1000
货号:
HP101-01/02/03/04
所属分类
蛋白纯化
数量:
-
+
库存:
3996
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
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说明书
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HisGrip Elite

告别透析无需重生,蛋白纯化飞速搞定!

His - Tag蛋白纯化

HisGrip Elite以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联羧甲基乙二胺(TED)为配体,螯合镍离子后,形成非常稳定的八面体结构。与IDA、NTA等其它类型Ni填料相比,HisGrip Elite具有更强的兼容性,对EDTA、NaOH、DTT等具有很强的耐受性,可以直接用NaOH溶液对填料进行清洗而无需反复再生。可以适配商品化的各类中低压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户用于纯化His - tag蛋白。

  • 化学耐受性强
  • 无需剥镍再生
  • 动态载量高
  • 兼容性强
  • 填料寿命长

1. 强化学耐受性,无需剥镍再生

 

HP101纯化含5 mM或10 mM EDTA/DTT的样品,目的蛋白的纯度和回收率无显著变化,与竞品Supplier A相当。综合比较,HP101耐受10 mM EDTA/DTT,且性能不受影响。

 

2. 动态载量高(每毫升填料结合His - tag蛋白的能力)

在相同条件下,用某60 kDa重组蛋白的原核细胞裂解上清进行载量测试,HP101动态载量高达50 mg/ml以上,高于竞品Supplier A,表明HP101的动态载量更高。

 

3. 兼容性强

图中展示了HP101对不同分子量、不同来源(原核、哺乳动物细胞和酵母细胞)、不同类型(可溶上清和包涵体)样品的纯化效果。以竞品Supplier A为对照,HP101可以兼容不同类型的表达系统和大分子蛋白的纯化,纯化效果≥竞品Supplier A,同时兼容可溶上清和包涵体样品,有着较好的样品兼容性。

 

4. 填料寿命长

为了测试HP101的重复使用性能,在同一柱上连续进行了20次运行。左图为前14次运行的洗脱样品SDS - PAGE胶图,表现出非常好的重复性;右图为16 - 20次运行的洗杂和洗脱样品的SDS - PAGE胶图,洗杂步骤的去杂效果未见明显下降,洗杂和洗脱效果表明HP101具有较好的重复性。

2 ~ 8℃保存在20%乙醇中,根据不同目的地调整运输方式,不可冻存。

 

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:洗脱组分中没有目的蛋白?

A1:建议对诱导蛋白表达前的菌液/细胞上清液、诱导蛋白表达后的菌液/细胞上清液、裂解液、流穿液、洗杂组分进行SDS-PAGE验证:

(1)流穿液中含有大量目的蛋白:可能是由于His标签没有充分暴露,可在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂,或者考虑更换标签位置;适当提高缓冲液pH、降低咪唑浓度、调整缓冲液中盐离子浓度或者更换缓冲液都可能会提高His标签蛋白的挂柱能力。

(2)诱导蛋白表达后的菌液/细胞上清液无目的蛋白:表达量过低,富集的蛋白太少未能检测到,可优化表达条件,提高表达量。

(3)目的蛋白在洗杂组分中:目的蛋白结合较弱,可降低洗杂液中咪唑浓度或提高洗杂液的pH。

(4)诱导蛋白成功表达,流穿液、洗杂组分、洗脱组分均无目的蛋白:目的蛋白结合过强,不易洗脱,增加洗脱液中的咪唑浓度,或降低洗脱液的pH;蛋白易降解,在样品中添加适量的蛋白酶抑制剂,如1 mM PMSF。

 

Q2:产品被放进-20℃冻住了,有变干迹象,解冻了还能用吗?

A2(1)变干迹象可能是由于20%乙醇被冻住,导致柱内液面低于凝胶表面,水分蒸发。

(2)重新用ddH2O排尽柱子内的气泡并不影响产品性能,-20℃能稳定存放3天。建议按说明书储存,琼脂糖在低温环境可能裂开影响实验性能。

 

Q3:实验室中洗杂、洗脱的咪唑浓度与说明书不一致?

A3不同蛋白对咪唑浓度的要求不同,具体浓度可根据不同蛋白进行优化,以达到较优的洗脱效果。

 

Q4:产品说明书建议的是磷酸盐缓冲液,可以使用别的缓冲液吗?

A4:缓冲液除了磷酸盐缓冲液,还可使用Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液等。

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