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    HP202(单页版说明书)V23.1.pdf

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    2023-09-19 14:35:32
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    Ni Sepharose FF (NTA)实验指导手册 HP202-V23.1.pdf

    大小:
    2023-11-02 09:12:03
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Ni Sepharose FF (NTA)

载量高出天际,蛋白纯化更安“芯”
价格:
¥
509.0
市场价
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浏览量:
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货号:
HP202-01/02/03/04
所属分类
蛋白纯化
数量:
-
+
库存:
3996
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暂时无货
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说明书
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Ni Sepharose FF (NTA)

载量高出天际,蛋白纯化更安“芯”

His - Tag蛋白纯化

Ni Sepharose FF (NTA)以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联次氮基三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子后,形成稳定的八面体结构,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或螯合剂。与其它类型的Ni离子填料相比,Ni Sepharose FF (NTA)具有更高的蛋白载量。该产品可以用于大规模蛋白的纯化,可在相对较高的流速下,实现His - tag蛋白的纯化。

  • 动态载量更高
  • 样本兼容性好
  • 使用寿命长

1. 动态载量更高(每毫升填料结合His - tag蛋白的能力)

 

在相同条件下,用某60 kDa重组蛋白的原核细胞裂解上清进行载量测试,HP202动态载量高达80 mg/ml,高于竞品Supplier A,表明HP202的动态载量更高。

 

2. 样本兼容性好

图中展示了HP202对不同分子量、不同来源(原核、哺乳动物细胞和酵母细胞)、不同类型(可溶上清和包涵体)样品的纯化效果。以竞品Supplier A为对照,HP202可以兼容不同类型的表达系统和大分子蛋白的纯化,纯化效果≥竞品Supplier A,同时兼容可溶上清和包涵体样品,有着较好的样品兼容性。

 

3. 重复使用,性能依旧稳定

为了测试HP202的可重复使用性,在同一柱上连续进行了10次运行。上图为10次运行的层析图谱,HP202的洗脱峰显示出较好的一致性,竞品洗脱峰随着运行次数的增加逐渐下降;SDS - PAGE胶图显示,与第一次运行相比,HP202在运行10次后纯化效果和目标蛋白回收率无显著变化。综上,HP202具有性能更稳定,重复性更好。

 

2 ~ 30℃保存在20%乙醇中,室温运输。

 

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:洗脱组分中没有目的蛋白?

A1:建议对诱导蛋白表达前的菌液/细胞上清液、诱导蛋白表达后的菌液/细胞上清液、裂解液、流穿液、洗杂组分进行SDS-PAGE验证:

(1)流穿液中含有大量目的蛋白:可能是由于His标签没有充分暴露,可在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂,或者考虑更换标签位置 ;适当提高缓冲液pH、降低咪唑浓度、调整缓冲液中盐离子浓度或者更换缓冲液都可能会提高His标签蛋白的挂柱能力。

(2)诱导蛋白表达后的菌液/细胞上清液无目的蛋白:表达量过低,富集的蛋白太少未能检测到,可优化表达条件,提高表达量。

(3)目的蛋白在洗杂组分中:目的蛋白结合较弱,可降低洗杂液中咪唑浓度或提高洗杂液的pH。

(4)诱导蛋白成功表达,流穿液、洗杂组分、洗脱组分均无目的蛋白:目的蛋白结合过强,不易洗脱,增加洗脱液中的咪唑浓度,或降低洗脱液的pH;蛋白易降解,在样品中添加适量的蛋白酶抑制剂,如1 mM PMSF。

 

Q2:产品被放进-20℃冻住了,有变干迹象,解冻了还能用吗?

A2:(1)变干迹象可能是由于20%乙醇被冻住,导致柱内液面低于凝胶表面,水分蒸发。

(2)重新用ddH2O排尽柱子内的气泡并不影响产品性能,-20℃能稳定存放3天。建议按说明书储存,琼脂糖在低温环境可能裂开影响实验性能。

 

Q3:实验室中洗杂、洗脱的咪唑浓度与说明书不一致?

A3:不同蛋白对咪唑浓度的要求不同,具体浓度可根据不同蛋白进行优化,以达到较优的洗脱效果。

 

Q4:产品说明书建议的是磷酸盐缓冲液,可以使用别的缓冲液吗?

A4:缓冲液除了磷酸盐缓冲液,还可使用Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液等。

 

Q5:真核细胞分泌表达的可溶性蛋白需要进行透析或脱盐吗?

A5:为增加产品的使用寿命,建议透析或脱盐,或者更换HP101、HP201系列产品,耐受能力强,无需透析或脱盐。

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