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EpiArt DNA Methylation Bisulfite Kit V2

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EM102（单页版说明书）V23.1.pdf

大小：

2023-09-27 10:15:50

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EpiArt DNA Methylation Bisulfite Kit V2

快速便捷，转化无忧！

价格：

1250.0

市场价

元

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货号：

EM102-01/02

所属分类

甲基化

数量：

库存:

1998

*具体价格咨询当地业务员

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说明书

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EpiArt DNA Methylation Bisulfite Kit V2

快速便捷，转化无忧！

DNA甲基化转化

DNA甲基化与基因表达和生物学过程密切相关，在基因印迹、胚胎发育、染色体基因沉默和细胞周期调控等生理和病理过程中发挥着重要作用。EpiArt DNA Methylation Bisulfite Kit V2是一款柱式亚硫酸氢盐转化试剂盒，为EpiArt DNA Methylation Bisulfite Kit (EM101)的升级版本，该试剂盒缩短转化反应时间至100 min，未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99.5%。EpiArt DNA Methylation Bisulfite Kit V2 DNA投入量范围为100 pg - 2 μg，转化后的产物适用于PCR扩增、qPCR检测和NGS建库测序等下游应用。

1.转化效率高：未甲基化的胞嘧啶转化率≥99.5%。

2.转化速度快：转化时间缩短至100 min。

3.投入量兼容范围广：可兼容投入量范围为100 pg - 2 μg的DNA。

1.良好的样本投入量兼容性

以293细胞 gDNA为模板，掺入1% Unmethylated Lambda DNA，起始量分别为100 pg、1 ng、10 ng、50 ng、200 ng和2 μg。在不同投入量下，Vazyme #EM102转化率优于Vazyme #EM101、Supplier A或与之相当。

2.良好的样本类型兼容性

分别以5ng人cfDNA、1 μg人全血 gDNA、10 ng人FFPE样本、100 ng拟南芥 gDNA、100 ng噬盐古菌 gDNA为模板，掺入1% Unmethylated Lambda DNA。Vazyme #EM102对不同类型DNA样本的转化率均>99.5%，优于Vazyme #EM101、Supplier A。

3.更高的转化产物回收率

以293细胞 gDNA、人全血gDNA为模板，起始量分别为200 ng和1 μg，对转化产物进行单链DNA定量，Vazyme #EM102的转化回收率均高于Vazyme #EM101、Supplier A。

BOX 1：15 ~ 25℃保存，室温运输。

BOX 2：2 ~ 8℃保存，室温运输。

溶解后的CT Conversion Mix试剂需要避光保存。为了达到最佳效果，CT Conversion Mix推荐现用现配，若无法一次性全部使用，可于室温(15 ~ 25℃)保存24 h，0 ~ 4℃保存1周或者冷冻(-30 ~ -15℃)保存1个月。

关键词:

EM102-00

Q1：Input DNA的要求？

A：Nuclease-free ddH₂O或者0.1×TE Buffer溶解的DNA均可适用；可兼容动物、植物、微生物的细胞或组织提取的DNA；cfDNA。投入范围为100 pg - 2 μg，体积为20 μl；A260/A280比值在1.6 - 2.0之间。

Q2：样本投入体积可以超过20 μl吗？

A：可以，样本投入体积最高可达50 μl。可参考如下模板体积加量方案：

配制CT Conversion Mix 时根据投入的模板体积，减少添加Nuclease-free ddH₂O的体积，CT Conversion Diluent加入300 μl，CT Conversion Buffer加入50 μl。如：20 μL模板对应添加900 μL的Nuclease-free ddH₂O，30 μL对应添加800 μL的Nuclease-free ddH₂O，40 μL对应添加700 μL的Nuclease-free ddH₂O，以此类推。减少Nuclease-free ddH₂O的体积配制CT Conversion Mix 时可能存在粉末无法完全溶解的情况，可以剪去枪头顶部，吹打混匀后吸取悬浊液进行转化反应。

注意：该操作可能会影响样品转化率，非必要不使用，同时模板体积越高，转化率可能降低。

Q3：DNA回收率较低可能的原因和解决方案？

A：（1）对转化产物的定量方式选择错误：转化产物以单链形式存在，应使用ssDNA定量方式。

（2）Input DNA有杂质：确保DNA的A260/A280比值在1.6 - 2.0；

（3）E-Wash Buffer醇含量不足：请加入指定体积的无水乙醇，勿长时间开盖放置；　

（4）E-Desulphonation Buffer有机溶剂含量不足：请勿长时间开盖放置；

Q4：DNA转化率低可能的原因和解决方案？

A：（1）没有充分溶解CT粉末或CT Conversion Mix失效：按说明书提示正确溶解和保存CT Conversion Mix，并在其有效期内使用；

（2）反应温度或时间设置错误：请按照说明书正确设置反应温度与时间；

（3）Input DNA样本GC含量过高或投入量不在推荐范围：可延长转化时间，将64℃ 1.5 h延长至64℃ 2.5 h；

（4）若搭配Vazyme #NE103建库使用，请确保数据质控时已按建库说明书（附录二）对Tail部分进行trim。

Q5：EM102是否可以缩短转化时间？