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FastPure EndoFree Plasmid Midi Kit

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    DC205(单页版说明书)V23.1.pdf

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    2023-11-27 14:41:04
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FastPure EndoFree Plasmid Midi Kit

高产无内毒,可视化操作,转染级别,15-50ml质粒中提
价格:
¥
598.0
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货号:
DC205-01
所属分类
柱式提取
数量:
-
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999999
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说明书
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FastPure EndoFree Plasmid Midi Kit

无内毒素质粒中量提取试剂盒

高产无内毒,可视化操作,转染级别,15-50 ml质粒中提

质粒DNA提取;产物可用于酶切、PCR、测序、连接转化、转染

本试剂盒适用于提取15 - 50 ml过夜培养的菌液,采用优化的碱裂解法裂解细胞,通过独特的硅胶膜吸附技术与特殊的Buffer ERB和Buffer ERW溶液,可特异性结合质粒并有效地去除内毒素、蛋白、基因组等杂质。同时,添加指示剂的独特P2溶液,可以通过颜色的变化,指示裂解、中和是否充分,保证提取质量,实现可视化操作。提取的质粒DNA内毒素残留低,可适用于多种细胞的转染及各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接等实验。

高产高纯:50 ml 高拷贝菌液,可获得300 μg质粒

无内毒素:高拷贝质粒内毒素残留≤0.1 EU/μg

可视化操作:显色试剂,展示中和效果,为产物质量保驾护航

1、高产量

 

2、无内毒

 

3、可视化操作

 注:可视化操作可以规避质粒提取过程中,中和不完全带来的纯度和浓度低的问题

BOX 1:2 ~ 8 ℃保存,根据不同目的地调整运输方式;

BOX 2:15 ~ 25 ℃保存,室温运输。
关键词:
DC205-00
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

常见问题1:质粒DNA产量低

原因1:低拷贝

解决方案:不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使用量,使用100 ml过夜培养的菌液,同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2和Buffer P5的用量,洗脱液应65 ℃预热,以增加提取效率,其他步骤相同。低拷贝质粒,例如:pET系列,pWE15,SuperCos,pBR322,pACYC及其衍生载体,pSC101及其衍生载体等

原因2:大片段质粒(>10kb)

解决方案:洗脱液65 ℃预热,以增加提取效率,其他步骤相同

原因3:宿主菌株差异

解决方案:不同宿主对质粒产量也会产生影响,建议使用end A-大肠杆菌菌株, 如DH5α、TOP10及XL10等

原因4:Buffer P2析出

解决方案:Buffer P2低温时易析出,37 ℃加热至完全溶解,混匀后使用

原因5:菌液保存不当

解决方案:菌种保存过程中存在质粒丢失现象,建议培养细菌前最好先划线或涂布平板活化,以稳定产量

原因6:菌液培养时间过长

解决方案:菌的培养时间不要超过16 h,可控制在12 - 14 h

原因7:吸附柱长时间暴露于高温等不良环境

解决方案:进行08-1/常规提取步骤/步骤6
 

常见问题2:基因组污染

原因:裂解操作不当

解决方案:加入Buffer P2后,需温和颠倒混匀;处理多个样本时,裂解时间不要超过5 min

 

常见问题3:纯度低

原因1:盐离子残留

解决方案:用Buffer PW1和Buffer PW2各漂洗1次;建议沿吸附柱管壁四周加入,或加入后颠倒混匀2 - 3次,有助于减少盐离子残留

原因2:乙醇残留

解决方案:空离后可室温开盖放置5 min,尽量去除乙醇残留

 

常见问题4:内毒素残留高

原因1:加入Buffer P5后未充分混匀

解决方案:加入Buffer P5后应充分混匀至蓝色消失,若蓝色未消失可增加上下颠倒次数至20次,离心后上清应为澄清状

原因2:Buffer ERB析

解决方案:Buffer ERB低温时易析出,37 ℃加热至完全溶解,混匀后使用

原因3:加入Buffer ERB未充分混匀

解决方案:加入Buffer ERB后应充分混匀,可增加上下颠倒次数至15次

 

常见问题5:RNA残留

原因1:RNase A活性下降

解决方案:已加入RNase A的Buffer P1长时间室温放置可能会出现酶活下降,使用后应及时放回2 ~ 8 ℃

原因2:菌液体积过高

解决方案:由于菌体数量过多(>100 ml),导致Buffer P1中RNase A不足以消化菌体中的RNA,建议减少菌液体积

 

常见问题6:吸附柱堵塞

原因:离心机离心力过小

解决方案:不同离心机相同转速对应离心力不同,2,500 × g≤离心力≤8,000 × g

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