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HiScript II Reverse Transcriptase

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R201说明书-V22.1.pdf

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2022-05-27 11:00:22

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HiScript II Reverse Transcriptase

具有强耐热性和延伸效率的第二代逆转录酶

价格：

140.0

市场价

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货号：

R201-01/02

所属分类

分子诊断原料酶

数量：

库存:

39996

*具体价格咨询当地业务员

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说明书

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HiScriptII Reverse Transcriptase

具有强耐热性和延伸效率的第二代逆转录酶

逆转录；第一链cDNA合成；RNA 病毒检测；RT-qPCR

· 热稳定性高： 50℃半衰期超过 240 min，55℃半衰期可达 60 min
· 杂质耐受度强： 与其他产品相比，在木聚糖、异硫氰酸胍、CTAB 等杂质存在下，Vazyme #R201 逆转录效率高
· 检测灵敏度好：在不同的引物体系下，Vazyme #R201 检测灵敏度较高

1.高的热稳定性

2.更强的杂质耐受度

以1 μg HeLa 细胞总RNA 为模板，用不同的酶进行逆转录，同时在体系中加入不同浓度的各种反应抑制物。取1 μl cDNA 为模板，AceQ qPCR SYBR Green Master Mix 扩增human B2M基因，比较各种条件下C_T 值大小。更小的C_T 值代表更高的逆转录效率，即更高的杂质耐受度。

3.更高的检测灵敏度

以1 μg-1 pg HeLa 细胞总RNA 为模板，用HiScript II Reverse Transcriptase (R201) 做逆转录，取1 μl cDNA为模板，用AceQ qPCR SYBR Green Master Mix分别扩增B2M基因(A)和EGFR 基因(B)。

本产品是在HiScript Reverse Transcriptase的基础上，通过体外分子进化技术获得的一个新的逆转录酶突变体，其热稳定性和cDNA的合成能力大幅提高。本产品可在50℃的半衰期超过4 h，在55℃长时间反应保持稳定，提高了具有复杂二级结构模板的逆转录成功率。此外，本产品通过多个点突变，进一步增强了模板亲和力和行进性，可获得长达20 kb的cDNA。对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于富含多糖多酚的植物组织RNA的逆转录反应。

-30 ~ -15℃保存。

关键词:

R201

逆转录酶；RT酶；逆转录单酶；反转录酶；热稳定逆转录酶；热稳定RT酶；通用型逆转录酶；耐杂逆转录酶；高灵敏逆转录酶；逆转录；反转录；逆转录PCR酶；反转录PCR酶

Q1：原核生物RNA能用我们的逆转录试剂吗？

A1：可以。原核生物RNA没有polyA尾，所以在逆转录反应体系中需要以Random primer作为逆转录引物。

Q2：延长逆转录时间，是否可以提高逆转录效率？

A2：对于大多数基因，延长逆转录时间对逆转录效率并没有显著提升；对于一些GC含量较高或含高级结构的模板，延长逆转录时间可提升逆转录效率。

Q3：如何评判RNA质量？

A3：RNA质量从两个方面反应：

(1) RNA完整度。通过琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整度。以真核生物为例，完整的总RNA有清晰的三条带，分子量从大到小分别为28S、18S、5S，并且28S是18S亮度的两倍；若能看见三条带，但带型模糊或弥散，则说明RNA有部分降解，此时请立即进行逆转录反应，并适量加大模板量；若只能看见分子量很小的一条带或没有条带，则 RNA 已完全降解，需要重新提取。

(2) RNA的纯度。RNA的纯度可以通过OD_260/280和OD_260/230两个比值是否在1.8-2.1范围内进行判断，蛋白、离子等残留会使比值降低。

Q4：如何选择逆转录的引物？

A4：根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT或基因特异性引物进行逆转录。

(1) 随机引物：随机结合在RNA的任何区域，适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA类型的逆转录反应。

(2) Oligo dT：适用于具有PolyA尾的RNA（原核生物RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有PolyA尾）。由于Oligo dT结合在PolyA尾上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量的降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

(3) 基因特异性引物：与模板序列互补，适用于序列已知的基因逆转录。

cDNA后续进行PCR扩增长片段，一般用Oligo dT或者基因特异性引物，不建议使用随机引物，因为随机引物是随机结合的，cDNA片段会偏短，可能会对长片段扩增造成稀释，后续扩增不出全长的目的基因；cDNA后续进行qPCR，一般使用Oligo dT和随机引物的混合物，可以避免3’端和5’端的扩增偏好性。

Q5：可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗？

A5：不可以，逆转录产物cDNA是混合物，除了cDNA产物以外，还有buffer、逆转录酶、引物，同时还包含未转录的模板RNA，总RNA中的tRNA、rRNA等，都会干扰浓度测定结果，因此不能反应真实的cDNA产量。