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    C406(单页版说明书)V23.1.pdf

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    2023-12-06 17:45:43
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SwiftCut EcoRⅤ

5-15min快切,一管缓冲、多酶通用 
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SwiftCut EcoRⅤ

快速限制性内切酶EcoRⅤ

5-15min快切,一管缓冲、多酶通用 

基因组DNA,质粒DNA和PCR产物的酶切。

SwiftCut系列限制性内切酶是一类经过基因工程重组的快速限制性内切酶。所有的SwiftCut系列内切酶均可在5 - 15 min内完成对DNA的特异切割,适用于质粒DNA、PCR产物以及基因组DNA的快速酶切。所有的SwiftCut系列内切酶在通用的10 × SwiftCut Buffer或10 × SwiftCut Color Buffer中均具有100%活性,方便在同一反应体系中同时进行多种酶切反应。此外,10 × SwiftCut Color Buffer内包含红色和黄色示踪染料,方便直接进行产物的凝胶电泳。10 × SwiftCut Color Buffer内的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

其识别序列和切割位点如下图:

快速:酶切时间短至 5-15min,节省实验时间。

便捷:任意酶均可使用同一 Buffer,多酶切反应简便;使用 SwiftCut Color Buffer 酶切后可以直接电泳。

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

 

关键词:
C402
C411
C415
C417
表达载体构建解决方案
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 Q1:酶切不完全。

A1:(1) 模板DNA不纯。模板DNA制备过程中使用到乙醇、氯仿、苯酚、SDS、EDTA等,残留在DNA 模板中,会不同程度影响酶的活性,可将DNA过柱纯化;建议使用PCR纯化后的产物,PCR中参与扩增反应的DNA聚合酶具有外切酶活性,可能会影响酶切产物,进而影响克隆效率。

(2)酶切位点数量。模板DNA上酶切位点的数量决定酶的用量,酶切位点数目多的模板切割效率低于酶切位点少的模板;基因组DNA使用的酶切体积一般高于PCR产物以及质粒DNA。

(3)限制性酶切位点。酶的识别位点过于接近终端(线性DNA)以及切割位点相邻(双酶切)都可能影响酶切割DNA的效率。切割位点相邻的双/多酶切需注意酶切顺序,先酶切识别序列两端需要有多个碱基的位点,再酶切其他位点。

(4)DNA结构。超螺旋DNA完全酶切比线性DNA所需要的酶量高,同时需要提高酶的用量和延长反应时间。

(5)部分DNA溶液粘在管壁上,反应前务必使反应液离心至管底。

(6)内切酶取样不准。建议配制完其他组分后,最后再加入酶。

 

Q2:条带完全没有被切割。

A2:(1)DNA不存在该酶识别顺序,过量酶消化进行验证并换用其它酶切割DNA。

 

Q3酶切后条带错误。

A3:(1) 组分污染。模板DNA、酶、反应所用组分被其它限制性内切酶、DNA和核酸酶污染。

(2) 模板DNA突变,底物DNA在扩增过程中引入了突变,突变可能破坏已知的识别位点或创造出新的酶切识别位点,从而产生错切条带。可对模板DNA测序判断是否突变。 

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